Способ хранения культур тионовых ацидофобных бактерий Советский патент 1984 года по МПК C12N1/04 

4

СО Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам хранения культур бактерий. Известен способ хранения микроорганизмов, включающий помещение их в столбик питательной среды, содержащей 0,2% агара, на глубине 2,5-3 см от поверхности столбика C Однако данный способ не пригоде для хранения культур тионовых ацидофобных бактерий, так как элементарная сера, образуемая при окисле нии энергетического субстрата,быст ро окисляется, что отрицательно сказывается на выживаемости бактерий . Кроме того, посев культуры проводят уколом микробиологической иг лой в столбик питательной среды,чт совершенно не подходит для хранени тионоБых бактерий, так как укол способствует разрыву агара и быстр му соприкосновению воздуха с молек лярной S (продукт метаболизма), что приводит к затвердеванию и выс ханию серных колоний, покрытых элементарной серой, а также не обеспечивает образование одиночных колоний необходимых для сохранения и последующего выделения чистых культур. Наиболее близким к предлагаемом по технической суц.ь-юсти и достигаемому эффекту является способ .хр нени/. культур тионовых ацидофобыых бактерий, предусматривающий посев суспензии бактерий в пробирку с питательной средой, содержагдей тио сульфат натрия в качестве источника энергии, источник азота, минеральные соли, дрожжевой экстракт. Сохранение чистых культур тионо вых бактерий осуществляют в жидкой питательной среде, причем нужно де лать пересевы не позднее как через 7-10 дн, L2, К недостаткам способа относится непродол5кительность хранения и сложность осуществления. Целью изобретения является увели чение длительности хранения, а также упрощение способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу хранения ,культур тионовых ацидофобкых бактерий, предусматривающему посев суспензии бактерий в пробирку с питательной средой, содержавшей тиосульфат натрия в качестве источника энергии, источник азота, минеральные соли, дрожжевой экстракт, в пи- ательную среду вводят 1,0-1,3% выщелоченного агара, а посев осуще.ствляют путем помещения суспензии бактерий на дно пробирки с после-дующим заполнением ее питательной средой на высоту, б.-Ю см, после чего перемащивают питательную среду с суспензией бактерий. Способ осуществляют следующим образом. При хранении тионовых бактерий в столбике агаризованной питательной среды высотой до 5 см происходит значительная гибель бактерий вследствие обезвоживания. В этом случае отмирание клеток может быть также следствием концентрации продуктов метаболизма и солей. Более высокий слой среды (1015 см) не обеспечивает максимальной физиологической активности сохраняемой популяции. Активность куль туры, определенная по окислению тиосульфата в жидкой среде Баалсруда, через б мес хранения составляет 9,2% за 120 ч. Максимальная физиологическая активность бактерий достигается при хранении их в столбике питательной среды высотой 8-10 см. После хранения культуры в течение б мес. активность окисления, тиосульфатаза 120 ч составляет 90%. Оптимальное содержание агара в питательной среде составляет 1,01,3%. Питательная среда с содержанием агара меньше 1% является полужидкой, что отрицательно сказывается на выживаемости и активности бактерий, Содержание агара выше 1,3% ускоряет высыхание питательной среды, при:аояит к растрескиванию агара,что способствует проникновению воздуха, значительному окислению средь и сокращению сроков хранения культуры. За б мес. хранения при содержании агара в среде 1,4-2,0% выживает 12,3% тионовых бактерий. Пример 1. Модифицированную питатехдьную среду Баалсруда готовят на дистиллированной воде, содержащей,, %: выщелоченный агар 1,0 NIUCI 0,01; NaaS.Oj- 51-ЬО 0,25; Na ПС б/о, 05; MgCi; 0,005; 0,001. Из КН,,0 0,01; FeS047H20 срс.дыисключается ККС;,. Реакцию среды устанавливают до рК 6,9. Одну 5-тк суточную колонию Tliiobaxillus Т. thioparus, содержащую 10 клеток с чашки Петри, переносят на знутрекшою стенку стерильной пробирки-, тщательно растирггют тонкой стеклянной палочкой с оплавлен11 №1 концом и заливают 1 MJ стерильной воды. Из этой суспензии приготовляют десятикратные разведения всего семь) и четыре последних заливают агаризованной средой на высоту столбика 8 см, которую тщательно перемешивают. Посевы культивируют в термостате при в течение 5-7 сут, чего их просматривают под мальал увеличением микроскопа и оставляют для хранения в холодильнике при Пример 2. Модифицированную среду Баалсруда, аналогичную применяемой для культуры Т. thioparus используют для культивирования Т. intermedius, но с добавлением 0,2% дрожжевого экстракта. Хранение культуры и способ его применения аналогичен описанному для Т. thioparus (пример 1). Данные по сохранению тионовых бактерий и их физиологической активности представлены в таблице.

СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КУЛЬТУР ТИОНОВЫХ АЦИДОФОБНЫХ БАКТЕРИЙ, предусматривающий посев суспензии бактерий в пробирку с -питательной средой, содержащей тиосульфат натрия в качестве источника энергии, источник азота, минеральные соли, дрожжевой экстракт, о т л и ч а ющ и и с я тем, что, с целью увеличения длительности хранения, а также упрощения способа, в питательную среду вводят 1,0-1,3% выщелоченного агара, а посев осуществляют путем помещения суспензии бактерий на дно пробирки с последующим заполнением ее питательной средой на с высоту 8-10 см, после чего перемешивают питательную среду с суспен(Л зией бактерий.

Известный Т. thioparus Баалсруда Не (контроль)(минеральнаясреда) Предла- Т. thioparus То же 100 гаемый Известный Т, interme- Баалсруда Не (контроль) dius +0,2% дрожжевого экстрактаПредла- Т. interme- То же 100 гаемый dius

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным экономичен, прост, доступен и позволяет сохранить в течение длительного периода времени высокую .активность и сохранность культур, а также существенно экономит, рабочее время исследователя и расход химических реактивов. хранится, погибает 100 100 100 100 90 хранится, погибает 100 100 100 100 90