СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ Советский патент 1974 года по МПК G01N33/569 

1

Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной микробиологии, а именно к диагностике патогенных микробов семейства энтеробактерий.

Известен способ идентификации патогенных энтеробактерий с использованием девяти тестов, включающий посев микроорганизмов в питательную среду в шести пробирках и выращивание их в ней в течение двух-трех дней.

Однако недостатком известного способа является то, что известный набор тестов не в состоянии диагносцировать вновь описанные таксономические группы - Аризона, Гафния, Провидендия, Эдвардсиелла, требующие дополнительных тестов. Способ громоздок и не обеспечивает быстроты процесса определения родовой, групповой и видовой принадлежности патогенных энтеробактерий.

Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса определения родовой, групповой и видовой принадлежности патогенных энтеробактерий.

Это достигается тем, что в предлагаемом способе производят посев изучаемой культуры последовательно в различные по составу среды - первую, содержащую пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, лактозу, сахарозу, мочевину и индикатор, затем после 4- 5 час культивирования при 43°С выделяемые

2

в первой среде не сбраживающие лактозу или сахарозу и не разлагающие мочевину культуры высевают во вторую среду, содержащую в нижнем слое полужидкий питательный агар,

а в верхнем слое пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, тиосульфат натрия, лизин и индикатор, и в третью среду, содержащую пептон, поваренную соль, дульцит, маннит и индикатор с последующим опреде.тением антигенного строения (о-антигены) культуры, снятой с третьей среды.

Предлагаемый способ осуществляется путем введения в комбинацию интегрированных (ком плексных) сред принципа последовательного трехфазового отбора (СИТО).

Первая среда (для экспрессного определения в одной пробирке в точение 4-5 час при 43°С ферментации лактозы, сахарозы и уреазной активности).

В среду входит: вода 100 мл; пептон 0,4- 0,6 г; поваренная соль 0,3-0,5 г, дрожжевой экстракт 3,0-5,0 мл, лактоза и сахароза по 0,2-0,3 г 1,6%-ный щелочной раствор бромтимолового синего 0,2-0,3 мл; стерилизация при 1/2 атм 20 мин. После стерилизации прибавляют 3-4 мл 50%-ного водного (самостерилизующегося) раствора мочевины и разливают асептично в маленькие пробирки по 0,4-

0,5 мл.

Вторая среда (для определения подвижности, декарбоксилирования лизина, образования индола и сероводорода).

Среда состоит из двух слоев.

Нижний слой.

Питательный бульон100 мл

Агар-агар0,2-0,3 г

Помещают в пробирки по 2,5-3,0 мл, стерилизуют .при 1 атм 10-12 мин и охлаждают в вертикальном положении;

Верхний слой.

Вода100 мл

Пептон0,8-1,2 г

Дрожжевой экстракт2,0-3,0 мл

Поваренная соль 0,3-0,5 г, тиосульфат натрия 0,02-0,06 (предпочтительно 0,05 ) г, лизин 1,0 г, 1,6%-ный щелочной раствор бромтимолового синего 0,2-0,4 мл. Стерилизуют при 1-2 атм 20 мин, разливают асептично вторым слоем по 2,0 мл в пробирки с застывшим полужидким агаром. Посев производят уколом до дна пробирки. Затем между пробкой и стенкой пробир:ки помещают реактивную бумажку, пропитанную 10%-ным водным раствором уксуснокислого свинца и высушенную в сушильном шкафу. После учета результатов на поверхность верхнего слоя наливают 0,2-0,3 мл реактива Ковача (парадиметиламидобензальдегид 5 г, амиловый или изоамиловый спирт 75 мл, концентрированная соляная кислота 20 мл) для определения индола.

Третья среда (для определения ферментации дульцита и маннита и газообразования при ферментации этих углеводов. Эта же среда служит и для накопления биомассы для заключительной фазы идентификации - серологической).

В среду входит: вода 100 мл, агар-агар 1,2- 1,5 г, поваренная соль 0,5 г, пептон 1,0- 1,5 г, маннит 0,08-0,1 г, дульцит 1,0-1,2 г, 1,6%-пый щелочной раствор бромтимолового синего 0,3-0,5 мл. Разливают в нробирки но 4-5 мл, скашивают но типу среды Ресселя (столбик и высокий скос). Посев производят штрихом по поверхности скоса и уколом в столбик.

Способ заключается в следующем.

Подозрительную колонию с элективно-дифференциальной среды вносят целиком в перБую среду, которую помещают в водяную баню при 43°С и в этой же бане - в термостат при 43°С. Через 4-5 час учитывают результат- пробирки с пожелтевшей и -посиневшей средой исключают (для выявления энтерспатогенных кишечных палочек из пожелтевших пробирок можно сделать высев на сектор среды Эндо). Из пробирок с неизменной или темно-зеленой окраской среды культуру высевают во вторую и третью среду, во второй пробирке помещают между пробкой и стенкой пробирки реактивную бумажку для выявления сероводорода и ставят обе пробирки в термостат при 37°С на 18-20 час, затем учитывают изменения в средах второй и третьей, ставят реакцию на индол во второй среде.

На основании комбинации биохимических свойств определяют ориентировочную принадлежность изучаемой культуры к любой группе патогенных энтеробактерий. Культуры, отвечающие признакам патогенных энтеробактерий, испытывают в реакции агглютинации адсорбированными сыворотками соответственно биохимической характеристике.

Предмет изобретения

Способ идентификации патогенных энтеробактерий путем посева микроорганизмов в питательную среду и выращивания в ней, о т л и чающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса определения родовой,

групповой и видовой принадежности патогенных энтеробактерий, производят посев изучаемой культуры последовательно в различные по составу среды-первую, содержащую пептон, дрожжевой экстра1кт, поваренную соль,

лактозу, сахарозу, мочевину и индикатор, затем после 4-5 час культивирования при 43°С выделяемые на первой среде несбраживающие лактозу или сахарозу и не разлагающие мочевину культуры высевают во вторую среду, содержащую в нижнем слое полужидкий питательный агар, а в верхнем слое - пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, тиосульфат натрия, лизин и индикатор, и в третью среду, содержащую пептон, новаренную соль,

дульцит, маннит и индикатор, с последующим определением антигенного строения (о-антигены) культуры, снятой с третьей среды.