Способ определения триамтерена и его метаболитов в крови Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к фармакокинетике лекарственных веществ и касается способов определения лекарственных вацеств в крови с целью увеличения эффективности применяемых средств и уменьшения их побочного действия.

Известен способ раздельного определения триамтерена и его метаболитов в крови методом жидкостной хроматографии высокого разрешения IJ.

Известна флюориметрическая методика определения триамтерена в биологическом материале f23.

Известен также способ, предусматривающий определение триамтерена в биологических жидкостях с помощью флюоресцентного метода СЗ J.

Недостаткам известного способа является его малая чувствительность не позволякщая определять триамтерен в крови человека в динамике после приема терапевтических доз.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа, обеспечение многократного определения трнамтерена в крови человека в динамике после приема терапевтических доз препарата.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения триамтерена и его метаболитов в крови путем флюориметрии, в крови осаждают белки и из полученной надосадочной жидкости экстрагируют целевой продукт ацетоном, охлаледенным до (-10) - (-12)С.

Способ осуществляют следующим образом.

Из пальца больного берут микропипеткой Ofl мл крови. Пипетку промыаают только дистиллированной водой, так как растворы гепарина или цитрата влияют на резулбтаты анализа. Кровь переносят в пробирку диаметром 7 мм и длиной 50-60 мм, в которую предварительно отмерено 0,7 мкл охлажденного в морозильной камере холодильника до (-10) - (-12)с ацетона (ч .) . Содержимое пробирки перемещают 5 мин г при этом происходит осаждение белков плазмы и форменных элементов крови, которые не дают возможности провести анализ триамтерена в крови. Одновременно происходит экстракция триамтерена из жидкой части крови и ее форменных элементов в ацетон, так как растворимость триамтерена в ацетоне весьма высокая. Наилучшая экстракция (более 90%) получена в ацетоне, другие жидкости (Н-бутанол, гептан, этилацетат, хлороформ, эфир, трихлоруксусная кислота) дают более низкие величины экстракции триамтерена. Для обеспечения наименьшего исходного фона флюоресценции экстракцию триамтерена из проб крови производят в охлажденном aieTOHe. Для лучшего осаждения белков смесь ставят в морозильную камеру холодильника, в которую заранее помещают ванну, наполненную 5 спиртом и создающую охлаждение до (-10) -(-12)С. Охлаждение пробирок с пробами крови производят 30 мин. На всех этапах пробирки, содержащие ацетон, закрывают полиэтиленовыми

10 пробками для предотвращения испарения ацетона. После 30-минутного охлаждения пробирки Центрифугируют при 3000 об/мин 5 мин, надосадочную жидкость сливают в другие пробирки

5 и флюориметрируют.

Флюориметрирование производят на флюориметре или спектрофлюориметре, приспособленньЕми к работе с объемом жидкости 0,5 мл. Для этого использу0 ют кюветы, изготовленные из кварцевых трубок с внутренним диаметром Э мм или другие кюветы подходящего объема. При наличии высокочувствительного флюориметра типа Хитачи

5 возможно измерение флюорисценции в кюветах несколько большего объема. с соответствукщим увеличением объема ацетона, взятого для экстрагирования. Длина волны возбуждения флюод ресценуии 360 нм, длина волны регистрируемой флюоресценции 458 нм. При работе с флюориметром возбуждение производится светом ртутной лампы при первичном светофильтре

,1- Уфе-б, при вторичном - ЖС-3 и синем светофильтре.

Пример. Больной Ф., 52 года) диагноз: гипертоническая болезнь 11 стадии с преимущественным пораже0 нием сосудов головного мозга. Для лечения заболевания был назначен триампур в дозе: 2 таблетки 3 раза в день. Каждая таблетка триампура содержала 25 мг триамтерена и 13,5 г

5 гипотиазида.

В первый час после приема триампура концентрация в крови триамтерена нарастала, в 10.00 концентрация триамтерена в крови оказывается

0 максимальной - 13, г/мл,

в течение последующих 4 ч концентрации в крови прогрессивно падает. Параллельно изменению концентрации триамтерена изменяется и выделение.

триамтерена с мочой. Таким образом, наиболее существенный подъем концентрации триамтерена в моче и крови наблюдался 5ч.

Больному Ф. в последующие дни триампур давался 3 раза в день по

2 таблетки. Больной получал по

50 мг триамтерена и 25 мг гипотиазида в 8,00, 13.00 и 18.00 ч. Концентрация триамтерена в крови в первые два дня не определялась, в течение

5 третьего, четвертого., пятого дней

была равна 0,032-10 г/мп, в течение пятого и шестого дня она была равна нулю. Эти данные согласуются с результатами определения препара-п . та в крови после однократного приела. Трехкратный прием триампура в течение дня не может создать высокую постоянную концентрацию в крови в течение.суток, так как препарат обладает большой скоростью выделения. При этом достаточно высокая концентрация в крови не создается и днурез не возникает.

Предлагаемый способ достаточно прост, не требует дорогостоящей апгвратуры, удобен, так как позволяет проводить многократные анализы крови у одного и того же больного в течение суток.

Способ может быть применен в условиях клиники и использован в поликлинических условиях для контроля эффективности лечения триамтереном и

препаратами, содержащими триамтерен.

..СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИАМТЕFEHA И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ В КРОВИ путем флюориметрии, отличающий с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в крови осаждают белки и из полученной надосадочной жидкости экстрагируют целевой продукт ацетоном, охлажденным до (-10),- (-12) °С, (О Од 00 QO оо