Способ получения липидов Советский патент 1985 года по МПК C12P7/64 C12R1/72 

10

IN9 Si

О) Изобретение относится к микробиологической промьшшенности, а именно к способу получения липидов путем культивирования микроорганизмов.. Известен способ получения липи- дов, обогащенных фосфрлипидами, выращиванием дрожжей йа углеводородах в присутствии .водной питательной среды, содержащей источники a3Oja, калия, магния, фосфора в виде сульфата аммония, хлористого калия, сернокислого магния, фосфорной кислоты. Выращивание проводят при рН средь 3-8 и температуре 2738 С. Удельный расход воздуха соста ляет 20-200 . ч. Регулирование содержания фосфолйпидов в биожире проводят путем поддержания в питательной среде соотношения углерода и фосфора в интервале от 60:1 до 10:t. Из культуральной среды выделя ют биомассу центрифугированием. Полученные дрожжи высушивают и экстра „гируютиз них липиды органическим растворителем. Содержание липидов в биомассе 20-40% и содержание в ни фосфолйпидов до 20% pJ. Известен также способ получения липидов, предусматривающий выращива ние дрожжей в условиях аэрации на п тательной среде, содержащий углеводороды в качестве источника углерода, а также источники азота,, фосфора, калия и магния, сгущение полу ч.енной суспензии дрожжей, вьодержива ние сгущенной суспензии при нагревании с последующими отделением био массы дрожжей и экстракдаей из нее липидов 2. Вьщерживание сгущенной суспензии осуществляют при температуре 18-38°С в течение 6-24 ч. Со.держание липидов в биомассе 20%. Содержание фосфолйпидов, определен- ное в контрольном эксперименте, вос производившем услбвия известного способа, составляет 19-21% ,от количества липидов. Недостатком способа является Низ кое содержание фосфолипидной фракции. Цель изобретения - увеличение со держания фосфолипидной фракции в ли пидах. Указанная цель достигается тем, что в способе получения липидов, пр дусматривающем вьфащивание даожжей в условиях аэрации на питательной среде, содержащей углеводороды в ка 6 честве источника углерода, а также источники азота, фосфора, калия и магния, сгугчение полученной суспензии дрожжей, выдерживание сгущенной суспензии при нагревании с последующим отделением биомассы дрожжей и экстракцией из нее липидов, предложено Вьщерживание сгущенной суспензии осуществлять при температуре 55-95°С в течение 45-180 мин. Способ осуществляют следующим образом., Дрожжи выращивают непрерывным или периодическим способом на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода фракции парафиновых углеводородов, вьщеленные из нефтей различных месторождений, а также нефтяные дистилляты парафинистых и высокопарафинистых нефтей (например дизельные фракции нефти), . coдepжaFJf e 10-15% парафиновых углеводородов нормального строения. Водная среда содержит источники азота, фосфора/ калия, магния в виде сульфата; аммония, фосфорной кислоты, хлористого калия, сернокислого магйия, сернокислого марганца, сернокислого цинка, сернокислого железа. Культивирование дрожжей осущест- вляют.в условиях интенсивного перемешивания и аэрирования среды воздухом при рН среды 3-8 и температуре 27-38 С. Удельный расход воздуха 20-200 . ч. , ; Биомассу, полученную при выращивании, сгущают флотацией, центрифугированием, сепарацией, декантацией или -каким-либо другим способом от 5 до 25% АСВ. Сгущенную биомассу нагревают до 55-95 С:;и П1)и этой температуре вьщерживают в течение 45-. 180 мин единовременно ил1й в несколь,ко приемов. После тепловой обработки биомассу высушивают и экстрагируют из нее лИпиды органическим раствор1|:телем. Из полученного экстракта отгоняют растворитель и получают до 13% л 1пидов с содержанием фосфолйпидов до 49% (см. таблицу). При м е р 1 (контрольный). Дрожжи Candida guilliermondii вьфащнвали непрерывным способом на очищенньк жидких парафинах в присутствии водной минеральной среды, содержащей источники азота, фосфора, калия, магния. Состав питательной среды, мг/л Парафин15000 Сульфат аммония 3500 70%-.ная фосфорная кислота0,6 Хлористый калий175 Сульфат магния90 Железо сернокислое4,43 Марганец сернокислый8,86 Цинк сернокислый8,86 Медь сернокислая0,86 Дрожжи выращивали в ферментере объемом 30 л в условиях аэрации и перемешивания среды. Температура ферментации 31-32°С,рН. среды 4-4, коэффициент разбавления среды 0,2 Полученную суспензию дрожжей сгуща ли сепарацией. Содержание липидов биомассе 13%, в сгущенной суспензи 21% фосфояипидов. Сгущенную суспензию выдерживали течение 24 ч при и затем экстрагировали из нее липиды. Содерлсание липидов в биомассе 15%, в них 19% фосфолипидов. При м е р 2. Дрожжи Candida iguLlliermondii вьфащив ал и непрерыв ным способом на питательной среде, содержащей 2% Н -парафинов Сщ-С. Состав минеральной питательной среды, мг/л (46%Р,ОЛ Аммофос (NH)St) Дрожжи выращивали в аппарате об емом 30 л в условиях аэрации и пер м ешивания среды при темп ер атур е 32 34°С и рН 4,0-4,2. Интенсивность аэрации 130 нм/ЛЧ, скорость разбавления среды 0,2 ч. Суспензию в ращенных дрожжей сгущали на сепара торе. Сгущенную дрожжевую суспензи в течение 120 м нагревали при высушивали и из сухой биомассы бен зином экстрагировали липиды. Содер жание липидов в обработанной био6массе 11,5%, количество в них фосфолипидной фракции 45,6%. В контроле (без обработки) в биомассе было 9,6% липидов, содержащий 26,6% фосфолипидной фракции. П- р и м е р 3. Дрожжи Candida Ruilliermondii выращивали в условиях аналогичных приведенным в примере 1, вферментере объемом 800 м. Дрожжевую суспензию отбирали из ферментера и сгущали сепарированием. Полученную сгущенную дрожжевую суспензию нагревали при температуре 95°С в течение 45 мин и высушивали. Из сухой биомассы бензином экстрагировали липиды. Сухая биомасса содержала 11,7% липидов, количество в них фосфолипиднай фpakции 48,7%. В контроле (без обработки) в биомассе было 9,6 липидов, содержащих 26,6% фосфолипидной фракции. Пример 4. Дрожжи Candida salmonicola выравнивали непрерывнык( способом на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода пр1ямогонный нефтяной : дистиллят (фр.240 -360°С), включающий К -алканы количестве 4.,8%. Состав минеральной питательной среды, мг/л ( 50 70% H-jPQj KCl N5804. 7HjO FeSO. lEjO ZnSO. 7H20 IfaSO 7H20 Дрожжи выращивали в ферментере объемом 30 л в условиях аэрации и перемешивания среды при температуре 35-37 С,рН среды 4,0-4,2. Интенсивность аэрации 20 нм/кг.ч, скорость разбавления ср.еды 0,2 чГ Суспензию выращенных дрожжей сгущали сепарир ованием. Сгущенную, дрожжевую суспензию в течение -ч . 180 мин нагревали при и экстрагировали из нее бензином липиды. Содержание липидов в обработанной биомассе составило 13,1%, а колнчестВД.В-Них фосфолипидной фракции 38,4%,

«1102276б

В контроле (без обработки) в био- Таким образом, описанный способ массе бьшо 13,0% липидов, содержа- получения липидов обеспечивает уве П91Х 21,8% фосфолипидной фракции. личение в 1,5-2 раза содержания в

.липидах фосфолипидной фракции.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ, предусматривающий выращивание дрожжей в условиях аэрации иа питательной среде, содержащей углеводороды в качестве ИСТОЧНИКА углерода, а также источники азота, фосфора, калия и магния, сгущение полученной суспензии дрожжей, вшерживание сгущенной суспензии при нагревании с последующими отделением биомассы дрожжей и экстракцией иэ нее лишздов, о т л и ч а ю щ и И с я тем, что, с целью увеличения содержания фосфолипидной фракции в липидах, ввдерживание сгущеннсзй суспензии, осуществляют при температуре 55-95°С в Течение 45-180 мин.

Влияние условий тепловой обработки биомассы на .содержание в липидах фракции фосфолипидов