Известен опособ получения лиоидов выращива нием дрожжейнпродуц-ентов на углбводорода.х, налркмер парафиновой фракции нефти, В трИсутствИИ водной питательной среды и воздуха с последующим .выделением линидов из дрожжевой биомассы.
Недостатком способа является невозмож-ность ретулировать состав .получаемых лилидов. Однако от состава литидав зависит Область их применения - мыловарение, медищшская промышленность или в качестве смазочных материалов.
Цель изобретения - 1нолучение липидов заданного состава ino содержанию фосфолипиДОВ, ТрИГЛИ|ЦерИДОВ и свободных жирных КИСлот.
Поставленная дель достигается одновременным регулированием содержания источника углерода в среде и коэффициента разбавления среды (D). Найдено, что лип.иды с заданным составом указанных выше компонентов М01гут быть получены при содержанни источника углерода в среде (дизельного топлива) 25-50% и коэффициенте разбавления среды 0,,07 час--.
промышленных условиях при n iTOiiciiyibni перемешивании и аэрированпп среды воздухом. В качестве источника углерода мшк-ю ;icпользовать фракции иарафипоных углеводпродов, выделен 1ые из 1 ефтс1 1 ;1азлич ых л есторождений, а также нефтяные дистуктлятоты парафннистых и высоко11а,рафинисты нефтей (например, дизельные фракции нефти), содержащие 10-50% парафиновых тлеводородов нормального cTjioeiiiin.
Водная минеральная питательная среда содержит сульфат аммоння, фосфорную кислоту, хлористый калий и сернокислый магний. Ферментацию .проводят в условиях интенсивного ,неремен1ива,ния и aspniioBaHiiH среды возду.хом при рН среды 3-8 н TIMMIOратуре 27-38°С. Удельный насход почлхха составляет 20-300 .
Из культуралыю среды coTiapnpoRaHiiOM выделяют биомассу, которую затем Bijicxiiniвают. Ли1ннды отделяют экстра1 ц е1 | оргаиическнм растворителем. Выход биомассы составляет 50-75%, содержание лиииюп 20-40%.
Лнпиды для анализа выде.чяюг и:лизованной биомассы экстракнио хлороформ-этаиол (1:1). Фракци( став линидов определяют газожидкостной хроматографией метиловых эфнров кнслог на
хроматографе с шламеннО-ионИзационным де-Влияиие указанных выше факторов на, сотекгором.став липкдов показано в табл. 1 и 2. Изменение состава липидов дрожжей от значения коэффициента разбавления среды
-1
D, час
Таблица 1 
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ | 1970 |
|
SU270663A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ | 1970 |
|
SU273760A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ | 1973 |
|
SU362870A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОСКА | 1972 |
|
SU327246A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВО-ЖИРОВОЙ БИОМАССЫ | 1974 |
|
SU388621A1 |
| Способ получения липидов | 1979 |
|
SU839258A1 |
| Способ получения липидов | 1983 |
|
SU1102276A1 |
| МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ КОНВЕРСИЯ МЕТАНА | 2014 |
|
RU2658440C2 |
| ИА 1 | 1972 |
|
SU358359A1 |
| РАСА ДРОЖЖЕЙ К-41 | 1968 |
|
SU220197A1 |
Очищенные жидкие парафины
Дизельные фракции нефти
54,0
12,0 43,0
12,4
Примечание. Концентрация дизельного тоилива в среде составляла 10%.
Из таблицы ВИД1НО, что три фермеитации на очищенных жидких ларафинах с уве,личе«ием значения коэффициента разбавления среды содержание лииидов в биомассе возрастает с 19,8 до 28,6%. Выход фосфолипидной фракции несколько снижается (с 12,0 до 8,6%). Количество триглнцеридов практически мало за.виоит от скорости .процесса в принятых нами условиях культивирования.
Изменение состава липидов от концентрации дизельного топлива в среде
Ферментацию проводили при С : N 10 : 1 и О 0,1 час
Из данных табл. 2 .видно, что в процессе культивирования дрожжей нри {онцентрац Нях дизельного топлива в среде 10 и 25% воз-можно получать липнды, практически на 50% состоящие яз фосфолипндои. Дальпсйнасе увеjH 4e iHe кспцсптрацгП дизельного TOii.nn-a снижает вЫ|Ход фосфолипидов. Что касается триглицеридов, то закономерность обратная - в принятьих нами ,условиях ферментации нри увеличении концентрацин дизельного топлива В среде от 25 до 50% наблюдается увеличение колНЧеств-а триглице1ридов до 39,2%, а при, дальнейн:ем увелич.с,нни концентрации до 75% наблюдается некоторое снижение. При высоких концентрадиях дизельного топлива в среде (50--75%) в липидах на сапливаются в большем количестве свободные жирные кислоты.
17,7
7,2
26,5
74,7
7,4 3,5 56,9 19,7
При ионользОВании дизельного тоелива для культи.вироваиия микроорганизмов (см. табл. 1) увеличение значения коэффициента разба:влення среды спооо,бствует «акотлению фракции фосфолипидав.
Содержание ненасыщенных кислот в липидах уменьшается ир« увеличении коэффициента разбавления среды.
Таблица 2
При..мер 1. Дрожжи Candida sp. выращивают на дизельном топливе, выделенном И|3 нефти Ставр0 нольско1ло месторождения, в нрисутствии водной минеральной среды, содержащей соли фосфора, калия и ма1лвия, в ферментере емкостью 30 л в условиях аэрации и И|Ите1Н:Сивнога перемешивания. Процесс ведут нанрерьцвно со степенью р-азбавления среды 0,1 .
Состав минеральной среды, мг/л: сульфат аммоНИ|Я3500
70%-ная фосфорная кислота1,2
хлористый калий350
сернокислый магний . 175
Дрожжи от культуралыгой среды отделяют се:парИ|рова ием в присутствии леболывих коли честв .ностно-акТ|И,ВНОго вещества, затем вЫ:Су1И вают -при 105°С. Из сухих Д|рожжен экстракциер органическими растворителями извлекают листиды следующего .состава,
триглицериды флсфолипиды
свободные Жирные кислоты В составе кислот содержится
ленасыщеНных 50,8%, 1В том числе олеиновой 9,9%, ЛИнюлевой 4,7%.
П р и м е р 2. Дрожжи Candida sp. вы,раи1;ивают па днзельно.м топливе, яыделениом из 1не|фтей Ро1маЩкИ|НСко|Г|0 месторождения, в присутствии водпой минеральной ли.тательной среды, содержащей соли фосфора, калия и магния, в ферментере емкостью 30 л в условиях аэрации и иптетюивиого перемеп1ипиппя. Процесс ведут иенрерытаю. Степень разбавления среды составляет 0,1 час. Концентра,ция дизельного толлива 50%, температура 30-32°С. Добавлением раствора NaOH поддержцвают рН среды 4-4,5.
Состав .минеральной среды, мг1л: сульфат аммойия3500
70%-ная фосфорная кислота1,2
хлористый к алий350
сернокислый магний175
.в 1000 мл водопроводной .
Из культуральпой среды сепарирова.нием отделяют дрожжи, вы1суЩ1Ивают и экстра кцией оргаиически.ми растворителями выделяют литиды, в составе которых содержится 5,4% фосфолипидов, 39,2% триглицеридов и 84,4% свободных жирных кислот; в жирнодаислотном составе 65,5% не1нась щенны х кислот, Б состав которых входит 26,6% олеиповой и 5,5% линолевой кислоты.
:П р и м е р 3. Дрожжи С. guilliermondi выращивают на очищенных л{идких парафинах в прадсутствио водной минеральной среды, в ферментере емкостью 17 м при аэрировании среды воздухом и гнте1нспвпом перемешива«ии. Процесс ведут Непрерывно. Степень разбавлення среды 6,2 . До.бавлением раствора NaOH поддерживали рН среды 4-4,5.
Состав минеральной среды, .«г/л; сульфат аммония1750
64,0
7Ь%-ная фосфорная кислота 0,47 12,7 хлористый калий525 11,6
сернокислый магний263
в 1000 мл водопроводной воды. Концентрация парафина в среде составляет 1,5%.
Процесс ведут при соотношении C:N:P205 30: 1 : 1.
Из культуральной среды сецарировацием выделяют дрожжи н затем высущнвают прц 105°С. В состав ли/пидав, юолзченных экстракцией органическими растворителями, вх,одят фосфолипиды8,6% и триглицериды 66,0%.
Жирные .кислоты лнпидов дрожжей на 47% состоят из ненасыщенных жирных кислот, в состав которых вх.одит 9,1% .олеиновой и 14,5% линолевой кислоты.
Предмет и 3 о б р е т е н и я
получения лппидов задаНного состава, регулируют содержа1ние источника углерода в среде и козффидиент разбавления среды.
тpllглицepидa ги и свободными жирными кислотами,, :онцентрацию истОЧНика углерода в среде поддерживают в пнтер.вале 25-50%, а коэффициент разбавления в интервале 0,2- 0,07 чac.
