Штамм @ @ 34-продуцент рибонуклеат (дезоксирибонуклеат )-3-нуклеотид-гидролазы Советский патент 1984 года по МПК C12N9/00 C12N1/20 

о

ел

Од 1 Изобретение относится к микроСЬОЛ гической промышленности, в частности к производству ферментных препаратов Впертэые фермент рибонуклеат (дезоксирибонуклеат) З-нуклеатидгидропазу (стафилококковую или микрококковук) нуклеазу) обнаружили в куль- туральнрй жидкости Stnphylococcuu aureus (М. pyogenes) штамм SAB lj . Недостатком штамма S, auretis SAB является низкая активность продуциру мой им нуклеазы в культуральном супернатанте - 0,0283 ед/мг белка. В настоящее время фермент стафило кокковая нуклеаза выпускается в СП1А и ФРГ с использованием штамма Foggi, характеристика которого в литературе отсутствует. В СССР этот фермент не производится. Цель изобретения - обнаружение штамма - продуцента стафилококковой нуклеазы. Для этого изучено образование дез оксирибонуклеазы 36 штаммами ста562филококков различного происхояда,ения, музейных и свежевьщеленных -от людей и сельскохозяйственньгх животных. Нуклеазную активность определяли в экзопродуктах по методу Kunitr. Экзопродукты получали по общепринятой методике, выра1цивая стафилококки по на целлофановых дисках. Активность ДНКазы колебалась в пределах 11,0-399,3 ед/мин/мг белка. Отобрано 16 штаммов с повьшенной ДНКазной активностью. В зкзопродуктах этих 16-ти культур была определена РНКазная активность, которая колебалась от 44,0 до 96,6 ед/мин/мг белка, а также активность загрязняюших ферментов протеазы (24,0-97,6 ед/мин/мг белка) . и щелочной фосфатазы (1-89 ед/мин/мг белка). Из названных штаммов отобрано пять, имеющих активности в пределах: ДНКазы 332,0-399,3 ед/мин/мг белка, РНКазы 44,0-88,7 ед/мин/мг белка. Уровень фосфатазы у всех культур низкий (1,0 ед/мин/мг белка). Данные исследования представлены в таблице.

Штамм Staphylococcus aureus 34 (Коллекция Государственного научноисследовательского института стандартизации и контроля медицинских биоло,гических препаратов им, Л.А. Тарасевича Министерства здравоохранения СССР)продуцент рибонуклеат (дезоксирибонуклеат)-З-нуклеотидгидролазы.

Выбранный штамм - продуцент 34 имел оптимальное сочетание активностей ДНКазы, самую низкую активность протеазы.

Обнаруженный штамм - продуцент 50 S. aureus 34, в 1980 г, вьшелен с кожи больного псориазом и не является этиологическим признаком заболевания. Он обладает всеми признаками золотистого стафилококка.55

Биохимические признаки штамма. Аэробно расщепляет глюкозу, анаэробно - маннит, имеет активность плазмокоагулазы, ДНКазы (качественное определение), вызывает гемолиз эритроцитов кролика.

Морфологические признаки штамма. Клетки круглые, располагаются гроздьями, кучками I или короткими цепочками. На мясопептонном агаре образует гладкие, блестящие, слегка выпуклые колонии с ровными краями. Образует лимоннй-желтый пигмент.

Вьделение штамма. Штамм выделен методом отпечатков с кожи. Для этого стерильное предметное стекло, покрыЭ11041тое слоем среды Коростылева, прикладьшали на разные участки кожи больного псориазом, в том числе на поверхность псориатической бляшки. Затем стекло в стерильной чашке Петри поме- щали в термостат при 37°на 18-20 ч. Со стекла собирали по 5 колоний одного вида и идентифицировали общепринятым способом. Получение внеклеточного продукта стафилококка с нуклеазной активностью. Фермент стафилококковая нукпеаза является внеклеточным, поэтому его активность изучали в экзопродуктах, которые получали следующим образом. 6 В чашки Петри заливали мясо-пептонный arapj после застывания которого поверхность покрывали стеридгьной пластиной целлофана, на который помещали 0,1 мл 18-ти часовой бульонной культуры стафилококка и через 18-20 ч роста в термостате собирали зкзопродукты. Рост смывали 1 мл физиологического раствора и полученную взвесь центрифугировали 20 мин при 15 тыс. об/мин. Клетки отбрасывали, внадсадочной жидкости определяли активности ферментов спектрофотометрически. Активность нуклеазы в экзопродукте штамма S. aureus-34 при пересчете на единицы активности составляет 0,0644 ед/мг белка.