Штамм @ . @ ВКМ @ , @ для изучения природы @ -плазмид и факторов вирулентности Советский патент 1984 года по МПК C12N15/00 

Изобретение относится к микробиологии, а именно к характеристике генетических особенностей штамма E.Coli J53Nal , которому передана конъюгативная гшазмида, кодирующая не только антибиотикорезистентностъ но и патогенные свойства бактерий,, и может быть использовано при выяв Ленин и изучении возбудителей острь кишечных заболеваний, вирулентные свойства которых определяются плазМИДами.

Известна гшазмида К88, обнаруженная в . энтеропатогенных. штаммах кигаечной палочки, выделенных от поросят tn.

Плазмида К88 вызывает маннозорезисгентную агглютинацию эритроцитов поросят, содержит белковые субъединицы с молекулярным весом 2200029500 дальтон, которые образуются только при температуре выше 18°С, Молекулярный вес плазмиды 50 МД.

Наиболее близкой к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является плазмида CFA/l, обнаруженная в штаммах кишечных папочек серогрупп 078, 015, 063, 025 э выдитенных от людей, боль ных диарреей t2 .

CfA/1 дает положительную реакцию маннозореэистентной агглютинации человеческих эритроцитов группы крови А при комнатной температуре. Плазмида, кодирующая антиген 1 фаи:тра колонизации, часто контролирует и продукцию термостабильного энтеротоксина. Молекулярный вес ее 60 Щ Они может переноситься к реципиентным бактериям E.coli К-12 с помогд ю R-факторов (RtsI, RI-19K) либо гшазмидами типа Ent, CFA/ подавляет фетильность бактерий, связанную с наличием R -фактора R-1-19K и является i .

Применение плазмиды СГА/1 не вседа позволяет изучить генетические и биологические свойства факторов вирулентности, контролируемых плазSMAaMH, так как она является некон7лгативной , способна к мобилизации R-фактораму или Ent-плазмидами, ведет себя как fi , не определяет устчивостн бактерий к антибиотикам,, а также синтез колицина.

Цель изобретения - выявление у штаммов энтеробактерий конъюгатквной плазмнды, применение которой позволит более полно изучить биологические и генетические свойства этого класса плазмид.

Плазмида обнаружена у штамма кишечной палочки, выделенного от больliorc) энтероколитом, и получила оР- значение pKMR2 П . Вновь выявленная плазмида придает штамму-хозяину устойчивость к ампициллину (Ар), стрептомитщну (Зга) , тетрациклину (Тс), хлорамфениолу (Ста), канамицину (Km)5 способность синтезироват антиген колонизации, колицин. Для изучения плазмидь pKMR2 1 1 она была передана методом конъюгации штамму EoColi J53Nal (Штамм депонирован в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под номером BKllR T))

Морфологические п;изнаки. Клетки E.coli ВКМ имеют вид прямых палочек величиной 1,5-3,0x0,30,5 мкм, слабо подвижны, перетрихи, спор и капсул не образуют, по Граму не окрашиваются.

Культуральные признаки. На мясопентонном агаре EoColi ВКМ дает слегка выпуклые полупрозрачные колонии диаметром -3 мм, на среде Эндо - круглые колонии, окрашеннь е в те:чно-красный цвет с металлически блеском, диаметром 1-3 Miyi, на кровяном агаре - круглые колонии без гемолиза, полупрозрачные. На мясопеп тонном бульоне E.coli ВКМ образует равномерное помутнение и осадок.

Физиологические признаки. E.coli BKli R-/D ж&татин не расжижает, образует индол, сероводород, восстанавливает нитраты в нитриты, ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу 5 лактозу, мальтозу, маннит, арабинозу; галактозу.

Генетические особенности. Штамм E.coli ВКМ применяется в качест зе реципиента при конъюгационной передаче Я -плазмид.

Конъюг.агдионные скрещивания штамма E.coli ВКМ R,j D 5 содержащего в своем составе конъюгативную плазмиду рКМЙП, проводили по известному методу, В качестве реципиентов использовапи E.coli СбОО Rif thrleu lacj E.coli СбОО Nal thrleu iac. Bo всех случаях были выявлень трансконъюганты, антибиотикорезистентность, а также способность синтезировать антиген колонизации и колицин которых соответствовали

Штамм E.Coli BKM (Коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) для изучения природы в-плазмид и факторов вирулентности.