Штамм @ @ 8,разлагающий @ -метилстирол Советский патент 1984 года по МПК C12N1/20 C02F3/34 C12N1/20 C12R1/385 C02F3/34 C02F101/30 C02F103/36 

ч4

СО ИгшГфетение относится к микробиологии, представпяет собой новьш штамм микроорганизмов, способный разлагатьоб-метилстирол, и может быть использовано в химической промышленности для очистки сточных; вод при производстве синтетического каучука . Сб -Метилстирол является высокотоксичным компонентом сточных вод производства синтетического каучука дивинилметилстирольного типа, загряз няющим не только водоемы, но и атмос ферный воздух. Известен бактериальный штамм S 107В1, вьщеленньй из почвы, способ ный частично октюлять ot-метилстирол но расп;епляя при этом ароматическое кольцо lj . Известен также штамм Bacillus cereua 3, разрушающий оС-метилстирол . . Однако игзвестный штамм разлагает 1)-метилстирол лишь в концентрации 2 г/л при продолжительности процесса 1Д сут в условиях ограниченной аэрации или 3 сут при встряхивании на качалке. Целью изобретения является получение штамма Pseudomotias aeruginosa разлагающего об -метилстирол , т.е. обладающего способностью к деградации oi,-ме.тилстирола с полным окислением aJH фaтичecкoгo фрагмента и pacmeoJTeHHeM ароматического кольца. Штамм вьрелерг из сточных вод производства синтетического каучука Штамм полностью деградирует молекул |.-метилстирола, используя, его в качестве единственного источника угле рода и энергии при концентрации его 13 среде 10 г/л. Процесс заканчивает ся через 2-3 сут. Характеристика штамма Pseudomona aeruginosa 8. Коллекционньш номер ВКМ B-1517D. Среда для хранения - ШЛ. Форма и размер клеток: 0,5-0,8 1(1,0-2,0 мкм у 24-часовой культуры, вьфашенной на мясо-пептонном бульон Клетки палочковидные, монотрихи, тип деления простой, грамм-отрицатель ные. На мясо-пептонном агаре культура образует круглые колонии диаметром 3-5 мм с ровными краями, слегка пыпуклые, гладкие, блестящие, ныцеляот в среду зеленовлтый пигмент. 162 На среде 8-Е со -метилстирапом образует округлые колонии диаметров. 1,5-2 мм. Физиолого-биохимические признак1: Аэроб, растет при 20-42 С, оптимум при 28-35 С. Оптимум рН 7,0-7,5. Анаэробно не ферментирует глюкоз Нитраты редуцирует. Желатину разжижает. Крахмал не гидролизует. Ацетоин не образует. Обладает оксидазной, каталазной и уреазной активностью. На среде КИНГ А образует пигмент пиоцианин, на среде КИНГ Б - пигмент флуоресцеин. Усваивает сахарозу, глюкозу, фруктозу, рамнозу, арабинозу, ксилозу, мальтозу с образованием кислоты. Из спиртов ассимилирует глицерин, этанол, маннит; из органических кислот - ацетат, цитрат, лактат, тартрат и сукцинат, из аминокислот - oi-валин и -аланин. Ассимилирует бензоат, ГТ-оксибензоат, протокатехоат, салицилат, бифенил , слабо растет на пирокатехине, не. усваивает толуол, парамета- и орто-ксилолы, псевдокумол, нафталин, фенилуксусную кислоту. П ц и м е р 1. Культуру Pseudomonas aeruginosa штамм 8 выращивают на мясо-пептонном агаре в течение суток. Суспензию выросшей культуры высевают в колбы емкостью 750 мл со средой 8-Е, разлитой по 100 мл. Состав среды, г/л: MgSO.yHjO 0-0,8, NaCl 0,5; КН2Р04 0,7; (NH)2HP04 1,5,, вода водопроводная до 1,0л (фосфаты стерилизуются отдельно в виде раствора в дистиллированной воде). об-Метилстирол вносят .непосредственно в колбу с культурой в концентг рации 10 г/л. Культуру выращивают на качалке при 200 об/мин, температура ферментации 29 С, контроль за процессом разложения осуществляют с помощью газовой и тонкослойной хроматографии. Содержимое колбы подкисляют до рН 2,0, трижды экстрагируют этило.вым эфиром, эфир упаривают на роторном испарителе, остаток растворяют в 0,1 мл этилового спирта и анализируют методами тонкослойной и газовой хроматографии. В основном

процесс разложения осуществляется в первые двое суток, остаточное содержание об метилстирола в среде через двое суток, определенное газохроматографически, составляет 1,5% от исходного, через трое суток 0,03%, на четвертые сутки oi-метилстирол в среде не обнаружен. Анализ культуральной жидкости на содержание промежуточных продуктов окисления доказывает полное разложение субстрата - окисление алифатического фрагмента с последующим расщепле

1173164

нием ароматического кольца по метапути.

Таким образгтм, новый штамм Pseudomonas aeruginosa 8, способный пол5 ностью разлагать(X-метилстирол, может быть использован для деградации об-метилстирола при высоком его содержании в промьщшенных стоках производства синтетического каучука. Исполь10 зование его в активных илах стоков каучукового производства позволит значительно снизить загрязнение окружающей среды.

Штамм Pseudomonas aeruginosa 8 (Всесоюзная коллекция микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, коллекционный номер ВКМ В-1517 Д), разлагающий о(.-метил стирол. (Л