Способ приготовления гистологического препарата ткани печени Советский патент 1984 года по МПК G01N33/52 A61B10/00 

I Изобретение относится к медицине а именно к области микроскопических исследованиУ паренхиматоаньпс органо в частности печени. Известен способ приготовления гистологического препарата ткани паренхиматозных органов, в частное ти ткани миокарда,включающий фиксацию биоптата в осмиевой кислоте, приготовление срезов и их окрашивание 2 Однако данный способ не позволяет приготовить.гистологический препарат ткани печени. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ приготовления гистологического препарата ткани печени, включающий фиксацию биоптата в раство-. pax формалина, последующее приготов ление срезов и их окрашивание в гематоксилин - эозин . Однако известный способ не позво ляет четко дифференцировать паренхи му от стромы, что затрудняет проведение цитоспектроскопических исследований при изучении структуры печени. Цель изобретения - четкая дифференцировка паренхимы от стромы Поставленная цель достигается согласно способу приготовления гист логического препарата ткани печени включающему фиксацию биоптата в ра ворах формалина,последующее приготовление срезов и их окрашивание, тем, что фиксацию проводят в. течение А5-48 ч, при А-6°С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 20-30 мин в смеси, содержащей о(,-нафтил ацетат, прочньй синий Б, ацетон и фосфатн буфер рН 7,27,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.%: о(,-Нафтил ацетат 20-45 Прочный синий Б 20-45 Ацетон0,3-0,7 Фосфатный буфер Остальное Способ осуществляют следукмцим об разом. Биоптат ткани печени фиксируют 10-12Z-HOM нейтральном формалине в 45-48 ч при . Далее биоптат гфомывают водой в течение 10 мин, приготавливают замороженные срезы на криомикротоме, которые окрашивают при 18-24 С в течение 20-30 м в смеси, содержащей в6 -нафтил. аце31тат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов,вес.%: ct-Нафтил ацетат 20-45 Прочный синий Б 20-45 Ацетон0,3-0,7 Фосфатный буфер Остальное Фиксация биоптата в 10-12%-ном растворе формалине в меньше 45 и больше 48 ч при температурах меньше 4 и больше 6 С не,позволяет получить четкую дифференцировку паренхимы от стромы,что видно из таблицы, где приведены показатели опти- ческого поглощения стромы и паренхимы печени интактного золотистого хомяка через различное время после экспозиции образцов ткани в 1012%-ном нейтральном формалине при -6 С (в условных единицах оптической плотности). Окрашивание при температурах меньше 18 и больше в течение времени меньше 20 и больше 30 мин также приводит к менее четкой дифференцировке паренхимы от стромы за счет полной илактивации выявляемь х красителем эстераз, имеющей место при этих режимах обработки. Пример 1. У наркотизированного животного вскрьшали брюшную полость, удаляли печень и из каждой доли ее вырезали кусочки, которые помещали в 10-12%-ный нейтральньй формалин на 45 ч, предварительно охлажденньй до 4 С, после чего промывали кусочки в дистиллированной воде 10 мин, изготовляли на микротоме замороженные ере зы. Срезы наклеивали белком на сухие обезжиренные предметные стекла и окрашивали при температуре 8°С в течение 20 мин в смеси, содержащей С-нафтил ацетат, прочный синий Б,ацетон и фосфатньй буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов, nof 7 . /о . ot-Нафтил ацетат20 Прочный синий Б20 Ацетон0,3 Фосфатный буфер Остальное Соотношение стромы и паренхимы в печени у интактного животного, в частности золотистого хомяка, проводится при планиметрии на микровидеомате на тестовой площади, равной. 19200 мк, принятой за 100%, и равно 0,096710,01.. . Пример 2.У наркотизированного животного (золотистого хомяка). инвазированного эписторхозом, вскры вали брюшную полость, удаляли печен которую помещали в 10-12%-ный нейтральный формалин на 48 ч, предварительно охлажденный до , после чего промывали кусочки в дистиллиро ванной воде 10 мин, изготавливали замороженные срезы, которые окрашивали при 24®С в течение ЗП мин в смеси, содержащей cL -нафтил ацетат, прочный синий Б,ацетон и фосфатньй буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.%: сС-Пафтил ацетат 45 Прочный синий Б 45 АцетонО,7 Фосфатный буфер Остально Соотношение стромы и паренхимы у золотистого хомяка при описторхозе 1,1iO,13. Специфичность и достоверность маркирования стромы и паренхимы обусловлены избирательным маркированием этцх структур. Интенсивная окраска паренхге атозного компонента ткани связана с выявлением в нем неспецифических эстераз. Четкая дифференцировка паренхимы от стромы позволяет проводить количественныеисследования с помощью телевизионного планиметра Микровидеомат и цитоспектрофотометра, что повышает точность определения различных патологических состояний. Строма Паренхима Время экспозициив формалине, ч 24,71 0,71,2±0,12 24,11 0,50,71± 0,06 17,810,9О 15,1tO,90,5tO,1

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ТКАНИ ПЕЧЕНИ, включающий фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее приготовление срезов и их окрашивание, отличающийся тем, что, с целью четкой диЛференцировки паренхимы от стромы, фиксацию в течение 45-48 ч при 4-6°С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 7.0-30. мин в смеси, содержащей сС-нафтил ацетат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,27,4 при. следуювщх соотношениях компонентов, вес.%: оС-Нафтил ацетат 20-45 Прочный синий Б 20-45 АцетонО,3-0,7 С Фосфатный буфер Остальное