Штамм @ @ ТЭПВ-2,используемый для идентификации и диагностики энтеропатогенных НАГ-вибрионов 2-го фаготипа Советский патент 1984 года по МПК C12N7/00 

(Л

с Изобретение относится к медицинекой микробиологии, а именно к ускоренной идентификации воз0удителей острых кишечных заболеваний, вызванных вибрионами неаггдютинирующих холерной D-1 сывороткой методом фаготипирования. Известен штамм Phagum cholericum 77 VII серотипа, активный к штаммам НАГ-вибрионов 56-го серовара lj Однако штамм Phagum cholericum 77 VII серотипа проявляет активность только к штаммам НАГ-вибрионов 56-го серовара. Целью изобретения является получение штамма, позволяющего иденти-. фицировать-и диагностировать энтеропатогенные НАГ-вибрионы 2-го фаготипа. Цель достигается с помощью штамма Phagum cholericum ТЭПВ-2 № Ф-110 вьщеленного путем селекции из rtonyляции музейного холерного фага А. Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-2 ; депонирован в коллекции бактериофаго Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток МЗ СССР № Ф-110, и характеризуется следунщими свойствами. ШтаммPhagum cholericum ТЭПВ-2 Ътносится к VI серологическому типу холерных фагов по классификации, принятой в СССР. Морфологические признаки. Фаг ТЭПВ-2 относится к 111-у гомологичес кому ряду4 Частицы фага состоят из головки гексагональной формы размеро 498x464 А и короткого отростка 115А Специфичность. Штамм Phagum chole ricum ТЭПВ-2 специфически активен к штаммам энтеропатогенных вибрионов, не относящихся к 0-1 группе второго фаготипа, вьщеляемых от больных ОКЗ, из сточных вод и открытых водоемов в различных регионах СССР. Он абсолютно инактивен к штаммам других видов вибрионов и близко родственных микроорганизмов V. pprahaemolyticus, V. alginolyticus, Aeromonas, Comamor nas, Plesiomonas, Pseudomonas, Proteus, Escherichia, Salmonella,3higel la, Alcaligenes, Citrobacter. Физиологические признаки. Фаг ТЭПВ-2 активен в отношении штаммов вибрионов эльтор и НАГ, находя1цихся в гладкой и R-формах. Оптимальная множественность инфицирования микробной клетки О,10,2 при плотности посева 1-10 м.т./мл. Полный лизис в жидкой среде при указанном соотношении наступает через 3-4 ч инкубации при , Для штамма Phagum cholericum ТЭПВ-2 применяют специально подобран ные эталонной штамм Vibrio cholerae R-1(145). Размножение фага ТЭПВ-2, Культуру штамма-продуцента V. choletae R-К145) отсевают на пластинку агара Мартена рН 7,2-7,6 из 3-4 ч бульонной культуры. Через 18-20 ч инкубации при 37 С отбирают типичные колонии, отсевают их на косяк агара Мартена с рН 7,2-7,6. Через 18-20 ч инкубации при 37 С произвбдят смыв выросшей культуры на косом агаре 5-ю мл бульо на Мартена, затем 0,4 ми этого смыв4 вносят в 100 МП подогретого в термостате бульона Мартена. Это обеспег ; чивает концентрацию 2-10 микробных клеток вибриона в 1 мп среды. Исходя из оптимальной множественности инфекции в бульон с культурой добавляют маточный фаг. : Содерлсимое засеянного флакона остЬрожно перемешивают и инкубируют при 37 С. За посевом ведут наблюдение. Наростагше мутности бульона свидетельствует о продолжающемся росте и размножении культуры микробного штамма. Через 3-5 ч наступает просветление бульона с посевом на 3 или 44-, что указывает на необходимость прекращения инкубации. Содержимое фильтруют через стерильные бакте.риальные свечи Л-3 или Л-5. , Отфильтрованный препарат проверя ют на стерильность, активность и спедафичность: и разливают в ампулы по 2мп. I , Препарат в жидком виде хранят в течение 3-х лет при 4-10 с. Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-2 применяют дпя идентификации и диагностики штаммов энтеропатогенных вибрионов 2-го фаготипа в разведениях 10. Расплавленный и остуженный до 50 С 2%-ный агар, приготов ленный на любой основе: Мартена, Хо-ртингера, МП, при рН 7,4-7,6разливают в стерильные чашки Петри по 2025 мл. Застывший агар подсушивают 30-40 мини вторым слоем наносят культуру испытуемого штамма в 0,7% агара с таким же рН. Затем на газон культуры бактериологической петлей

3 11200184

или репликатором наносят фаг по од-Использование штамма Phagum choleной капле из всех разведений. Чашки,ricum ТЭПВ-2 позволит идентифицирос подсохшими каплями закрывают крыш-вать энтеропатогенные НАГ-вибрионы

ками и инкубируют при . Через 3-,только 2-го фаготипа и позво4 ч можно учитывать результат, ко-j лит установить эпидсвязи в микторьй отмечается появлением стериль-роочагах между больными, а такньк пятен на газоне культуры вмес-же между больными и внешней сретах нанесения капель фага.дои.

Штамм Phagufe cholericum ТЭПВ-2 № Ф-110 (коллекция бактериофагов Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток МЗ СССР), используемый для идентификации и диагностики энтеропатогент ных НАГ-вибрионов 2-го фаготипа.