Штамм бактерий VIвRIо сноLеRаL 042 серовара, используемый для получения вирулентного фага 781 (781в)С-170 042/1 серовара Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 C12N7/00 C12N1/20 C12R1/63 

(46) 30.08.90. Бкш. № 32 ,

(21)4066689/28-13

(22)07.04.86

(71)Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт Микроб и Ростовский научно-исследовательский противочумный институт

(72)Т.А.Кудрякова, В.П.Мороз Н.М.Остроумова, О.С.Зимина, И.Е.Ушакова и Н.П.Коннов

(53) 576,.8.093 (088.8)

(56) Авторское свидетельство СССР

№701148, кл. С 12 N 7/00, 1980.

(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE , 042 СЕРОВАРА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОГО ФАГА 781(781в)С- 170 042/1 СЕРОВАРА (57) Изобретение относится к микробиологической прокьшшенности и каса- ется штамма бактерий Vibrio choleras 042 серовара, используемого для получения вирулентного фага 781(781в) С-170 042/1 серовара. Цель изобретения - изыскание штамма нового 042 серовара, спонтанно продуцирунядего фаг 042/1 серовара. Штамм V.cholerae вьщелен из объектов окружающей среды и депонирован под номером КМ-14(781), Продуцируемый штаммом 14(781) фаг .042/1 серовара может быть использо-. ван для идентификации энтеропатоген- ных вибрионов 042 серовара. 1 табл.

i

(Л

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации .холерных вибрионов.

Цель изобретения - изыскание штамма нового 042 серовара, спонтанно продуцирующего фаг 042/1 серовара.

Штамм Vibrio cholerae депонирован в Институте Микроб под номером КМ- 14(781). Штамм вьоделен из объектов окружающей среды,

Культурально-морфологические.признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,5-3 мкм в длину и 0,2-0,6 мкм в ширину, с одним полярно-расположенным жгутиком, спор и капсул не образуют, грамотрицательны.

На плотных питательных средах (агар Мартена, агар Хрттингера, ще- лочной мясопептонный агар рН 7,6+0,2) образует круглые, диаметром 3,5i ±0,5 мм, полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотнённым центром через 18 ч выращивания при 37+1 С,

На жидких питательнЬпс средах (буль он Мартена, 1%- пептонная вода, бульон Хоттингера рН 7,8+0,2) образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности части 6 ч выращивания при 37 + 1°С,

Физиолого-биохимическиё свойства. Тест на оксидазу положителен.

Разлагает до кислоты без газа ман

нозу, сахарозу, глюкозу, маннит, н.е

разлагает арабинозу, инойит, лактозу Окисляет и ферментирует глюкйэу на среде Хью-Лейфсона,

Образует декарбоксилазу лизина, не образует дигидролазу аргинина.

Разлагает.крахмал, ферментирует желатин. Не растет в присутствии 7-10% хлорида натрия.

Серологические свойства. Не агглютинируется видовой О и типовыми (Инаба, Огава) холерными сыворотками, агглютинируется моноварной вибри онной сывороткой 042 серовара, не агглютинируется моноварными сыворот ками других (02-041, 043-056) О се- роваров, .

Способен спонтанно продуцировать умеренный фаг ранее неизвестного се- ротипа, обозначенного 042/1, виру- леитные мутанты которого исполь зуют для лабораторной -диагностики энтеро- патогенных вибрионов V. cholerae 042 серовара.

Q

5

0 5

л

5

0

5 0

5

Умеренный фаг 042/1 серотипа имеет следующее, электронно-микроскопическое строение: головка гексагональной формы 300+22 А в диаметре, отростка не имеет, т,е, относится к мелким фагам II морфологической группы по систематике А,СаТихокенко (1968), Его одиночный, цикл развития характеризуется продолжительностью минимального латентного периода 31+ мин и средним урожаем 20+3 частиц на одну инфицированную клетку.

На загоне индикаторного штамма формирует негативные колонии круглой формы 5+1 мм В диаметре с неровным краем, плотным центром и узкой зоной неполного лизиса по периферии. Вирулентные мутанты отличаются строением колоний и спектром литического действия: колонии того же размера, но с прозрачным центром.

Умеренный фаг лизирует только индикаторный штамм (К,М 13), вирулентные мутанты 86-90% штаммов вибрионов гомологичного серовара.

Размножают штамм 781 в бульоне и на-агаре Мартена рН 7,6+0,2, хранят в лиофилизированном состоянии.

Использование штамма иляюстрирует- ся следукицим примером.

- П р и м е р. Для обнаружения спонтанной продукции умеренного фага 042/1 серотипа и его вирулентных му тактов штамм-14 (781) засевают в бульон Мартена рН 7,6+0,2 и выращивают при температуре 37+1°С в течение 20+2 ч, а затем фильтруют через фарфоровые бактериальные фильтры марки Ф-5. Полученный фильтрат в количестве 1,0 мл добавляют к 5,0 мл 0,7% агара Мйртена рН 7,6+0,2, расплавленного и охлажденного до в пробирке. Туда же вносят 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста специального индикаторного ма (К.М - 13), тщательно перемешивают и выпивают на агаровую пластинку (агар Мартена) в чашке Петри, После инкубирования при 37+1 С в течение 20+2 ч на чашке обнаруживают негативные колонии умеренного фага 041/1 и вирулентные мутанты последнего.

Платиновой иглой уколом в центр про.зрачной негативной колонии фаг переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона Мартена рН 7,6+0,2, подогретого до З7 с, Туда же вносят

0,2 мл бульонной культуры штамма- ментора (К.М,-13) и 5,0 нл 0,7% агара Мартена. Содержимое каждой пробирки перемешивают и выпивают на отдельную пластинку (агар Мартена) в чашке Петри и дают застыть второму агаровому слою. После вьфащивания в течение 20+2 ч в каждую чашку заливают по 10 мл бульона Мартена и шпателем перемешивают с верхним агаровым слоем, а часть переносят во флакон и фильтруют, как указано.

Полученный фильтрат вирулентного мутанта размножают в жидкой среде (бульон Мартена рН 7,6+0,2), К 100,0мл бульона добавляют 3,0 мл фильтрата и 1,0 мл бульонной трехчасового роста культуры штамма-ментора (К,М-13), ин- кубируют при в течение 2,+ ±0,5 ч до просветления, обеззараживают фил зтрацией через бактериологи -0

5

о

ческий фильтр (как указано), ставят контроль стерильности и используют - по назначению, В таблице дана характеристика спещ1фичности и активности вирулентного мутанта 781(781в)С-170 фага 042/1, откуда видно, что-вирулентные мутанты этого фага обладают широким спектром литического действия на культуры гомологичного О серо- вара энтеропатогенных вибрионов и высоко специфичны.

Применение изобретения для иденти - фикации энтеропатогенных вибрионов О42.,серовара повышает эффективность лабораторной диагностики НАГ-инфекциЙ,

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae 042 серовара, КМ-14(781), используемый для получения вирулентного фага 781(781в)С-170 042/1 серовара.

Спектр к специфичность ун реняого фага серотши 042/1 ,it его вир иггяого

иутвкта 781(781в)С-170

50

SO

782

34

36

20

39

fft