Штамм @ @ ТЭПВ-1,используемый для идентификации и диагностики энтеропатогенных НАГ-вибрионов 1-го фаготипа Советский патент 1984 года по МПК C12N7/00 C12R1/91 

W

с

Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-1 Ф-109 (коллекция бактериофагов Тби.лисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток V HKстерства здравоохранения СССР), используемый для идентификации и диагностики энтеропатогенных- НАГ- -вибрионов 1-го фаготипа.

OKi

: ел Изобретение относится к медицин кой микробиологии и касается созда диагностического штамма Phagura cho ricum ТЭПВ-1, используемого для идентификации энтеропатогенных НАГ -вибрионов 1-го фaгoтj пa. Известен штамм Phap:umcholericu 77 VII сёротипа, используеьий для идентификаций НАГ-вибрионов 0-56 сёротипа til. Однако данный штамм не позволяет идентифицировать НАГ-вибрионы 1-го фаготипа. Целью изобретения является полу чение нового штамма диагностического холерного фага ТЭПВ-1, исполь зуемогоДля идентификации и диагностики НАГ-вибрионов 1-го фаготипа. Штамм фага Phagum cholericum ТЭПВ-1 выделен путем селекции из популяции холерного фага 111-го сёротипа, хранится в коллекции бак териофагов Тбилисского научно-иссл довательского института йакцин и сывороток МЗ СССР под номером.Ф-10 Штамм фага Phagum cholericum ТЭПВ-1 характеризуется следуюпщми культурально-морфологическими приз наками, Частица фаГа состоит из головки гексагональной формы размером 590|45 и короткого отростка 115 А. Латентный период фага ТЭПВ50-55 мин при 100-200 мг% алетнного азота в 1 мл среда, на которой он размножается. При уменьшении до 50 мг% в 1 мл латентный период соответственно удлиняется до 65 мин. Оптимальная множественность инфекции 1:1 - 1г2 при концентрации .ti-l микробных клеток в 1 мл среды. На индикаторной культуре фаг агаре„ Мартена (рН 7,4-7,б через 18-24 ч при образует прозрачные разной величины - 0,5-2 мм стерильные пят правильной округлой формы с четко контурируемыми краями. Штамм Phagum cbolericum ТЭПВ-1 характеризуется следующими физичес кими свойствами. Высокоустойчив в хранении при 4-10° С до трех ле1Ь (срок наблюдения), при 22-2б°С до года, что делает его удобным для транспортировки. Для получения штамма Fhagum cho ricum ТЭПВ-1 применяют специально подобранные штаммы У1Ъго Nag 600 или V.Hag 205, высокочувствительны 1голько-к фагу ТЭПВ-1. Штамм Phagura cholericum ТЭПВ-1 специфически активен в отношении энтеропатогенных НАГ-вибрионов 1-го фаготипа, и абсолютно неактивен в ОТНОШ1ЭНИИ штаммов других видов вибрионов. Так, штаммы микроорганизмов V.Parahaemolyticus (58) V. Alginolyticus (50) Aeromonas (5 Pseudomonas (31,) Staphylococcus (5T Shigella (427) Salmonella (354) Citrobacter (43) Proteus (30) к фагу ТЭПВ-1 не чувствительны. Использование штамма Phagum cholericum ТЭПВ-1. Пример. Для размножения фага культуру штамма-продуцента отсевают на пластинку агара Мартена, рН 7,2-7,6 и 3-4 ч бульонной культуры. Через 18-20 ч инкубации при готовят 1-2 млрд взвесь агаровой культуры в бульоне и 0,5-1,0 мл ее вносят во флакон со 100-150 мл того же подогретого в термостате при бульона. Посев подращивают 2-3 ч при до концентрации . K./jMJl. Исходя из оптимальной множественности инфекции 1:1 или 1:2 добавляют фаг ТЭПВ-1 во флакон с культурой. Смесь фага с культурой быстро переносят в бутыль, содержащую 1,5-2 л также подогретого при бульона Мартена, рН 7,4-7,6. Все содержимое бутьши осторожно перемешивают и инкубируют в термостате при 37С. За посевом ведут наблюдение. Нарастание мутности бульона свидетельствует о продолжающемся росте и размножении культуры микробного штамма. Через 4-5 ч наступает просветление бульона с посевом на 3+ или 4+, это указывает на необходимость прекращения инкубации. Содержимое фильтруют через стерильные фарфоровые свечи Ль или .Л5 или через асбестовые пластины СФ, Фильтровальный препарат проверяют на ст.ерильность, активность и специфичность диапазона литического действ ия по известным методикам и разлив ают в ампулы.-по 2 мл. Препарат жидкий, хранят при 4-10 С. П р и м -е р 2. Штамм Phagum chole ricum ТЭПВ-1 используется ДЛЯ индикации и диагностики энтеропатогённых( , НАГ-вибрионов 1-го фаготипа. Расплав.л енный и остуженный до 50 С 1,5-2% агар на любой основе, рН 7,4-7,6, разливают в стерильные чшики Петри по 20-25 мл и после застывания подсушивают 30 мин при . В пробирки с 3 мл 0,7% агара, рН 7,2-7,6, расплавленного На водяной бане и остуженного до , добавляют 0,20,3 мл 3-4-часовой бульонной культуры испытуемого штамма НАГ-вибриона, тщательно смешивают и быстро выливают на агаровую пластинку в чашку. Петри. После его застывания на газон культуры платиновой петлей 2 мм или репликатором наносят указанный фаг из всех разведений. После подсыхания капель чашку закрывают крышкой, переворачивают вверх дном и инкубируют при 37®С. B случае необходимости получения

ускоренного ответа, результат учитывают через 3-4 ч,-а при плановом обследовании допускается и позже, в пределах 18-20 ч. Оценку литического действия фага ведут по 4-балльной системе: 4 - сливной полный лизис, 34- - множественные -негативные колонии фага или полный лизис со следами вторичного роста культуры вибриона, 24 - изолированные не-, гативные колонии фага (не менее 10) или пятно лизиса со значительным вторичной культуры вибриона. Положительным считывают ливис культуры от капли фага из любого разведения не ниже 2-f.

Использование штамма Phagua chole ricum ТЭПВ-1 позволяет Проводить ускоренную диагностику энтеропатогенных НАГ-вибрионов 1-го фаготипа и установить эпидсвязи в микроочагах между больными Ивнешней средой.