Штамм 97 фага НАГ-вибрионов 0-41 серовара Советский патент 1983 года по МПК C12N7/00 

(Л

с

CS . ..

Штамм 97

to

00

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть исполь зовано.в лабораторной диагностике. . Известен штамм Phagum NAG-vibrionom O- lnefotype 88, активный в отиршении НАГ-вибрионов серотипа Однако фаг 83 отличается низкой стабильностью при хранении даже при А-10 С, В этих условиях концентрация живых частиц к 2мае. хранения снижает ся в 10 раЗо При более высокой температуре (37°,) фаг погибает через 5 сут. Таким образом, препараты фага 88 имеют срок годности не более двух месяцев. Низкая жизнеспособность фага 88 ограничивает сферу его примене«-(ия с диагностической целью. Целью изобретения является новый штамм специфического фага-для идентификации энтеропатогенных НАГ-вибрионов серовара О-И , пригодный для широ кого использования в медицине, . Предложенный штамм выделен из воды открытых водоемов на территории СССР. В результате из культуры НАГ-рибриона 1. серовара получен умеренный фаг 1203, из которого выделен вирулентный мутймт на газонв индикаторного штамма ,2 0-41 Серова 1ра. Штамм 97 (1203- 2) фага НАГ-вибрионов серовара Phagura MAG 97 специфически активный в отношении НАГ-вибрионов 0-41 серовара, хранится в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф-100. Полученный штамм 97 фага НАГ-вибрионов 0-41 серовара имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики. Величина негативных колоний на газоне НАГ-вибриона 442, выращенного на агаре Мартена, равна 3,4tO,4 мм в диаметре. Край колоний ровный, дно прозрачное, по периферии - зона неполного лизиса. В отличие от фага 88, относящегося к X серотипу фагов НАГ-вибрионов 0-41 серовара, фаг 97 относится к Неизвестному ранее серотипуЛАГ-фа гов, который обозначен как ТТ евротип фагов НАГ-вибрионов 0-41 серовара с известными 10 серотипами холерных фагов и НАГ-фагом 88 серологического родства не имеет. Его корпускулы имеют головку гексагональной формы величиной 5В21Я и длинный упругий хвостовой отросток без чехла. Длина отростка 171 Д. При лабораторной проверке свойств фага 97 установлено, что он, так же как и фаг 88, обладает широким спектром специфического действия на вибрионы серовара, но отличается от фага 88 серологическими свойствами, строением частиц и стабильностью в процессе хранения. Препараты фага 97 при концентрации частиц VI-10 лизируют 81 штаммов O-il серойара, не более 2,2% НАГ-вибрионов других 5 сероваров, сохраняют неизменным свой титр f( концентрацию живых частиц) в течение 2 лет хранения при 4-10°С и не менее 2 вес. при 37С, Нехолерные вибрионы (фосфоресцирующие), микроорганизмы рода Pseudomonas Acromonas и кишечной группы не чувствительны к действию фага 97. Фаг 97 активно репродуцируется на клетках НАГ-вибриона 2 в бульоне Мартена, рН 7,6. При посевной дозе 1 о микробных клеток на 1 мл среды и множественности инфекции 1:1 при инкубации в течение 2 ч 30 мин при 37°С фаг накапливается до Ут 10 частиц на мл среды. Для получения диагностического препарата фага 97 используют агар и бульон Мартена с рН 7,6. Культуру штамма - продуцента № 442 18-часового роста при 37 на агаре Мартена - засеаают в бульон Мартена. Через 3 ч роста при 37С бульонную культуру добавляют к питательной среде (бульон Мартена) из расчета 110 м.т. на мл, туда же одновременно вносят фаг 97 из расчета нножественности инфекциИо 1:1. Через 2 ч 30 мин культивирования фаголизат фильтруют через бактериаль-. ные фяльтры марки ф-3, ф-5. Фильтрат разливают по ампулам и контролируют на специфическую и общую стерильность и активность. Готовый препарат используют для диагностики следующим методом. Готовят газон исследуемого штамма в слое мягкого агара по Грациа, т.е. добавляют О,2 мл бульонной культуры исследуемого штамма к 5 мл О, расплавленного агара (45С/, перемешивают и выливают на агаровую (2%) плас-. тинку в чашке Петри. После застывания второго слоя на его поверхность капают фаг 97. Чашку помещают в термостат при . Учет результатов проводят через Ч-8 ч. Пои обнаружении на месте нанесения фага литического пятн исследуемый штамм относят к вибрионам 0-4l серовара.

Фаг 97 высокостабилен при хранении нетолько в условиях .холодильника, но и неблагоприятных температурных условиях {374).

/ В холодильнике f-IOC) его титр остается неизменным не менее 2 лет {.срок наблюдения), при только через 3 мес. хранения было отмечено снижение концентрации частиц в 10 раз, тогда как фаг 88 при

/Погибает через 5 сут., а при сохраняет диагностический титр не более 2 мес. В отличие от фага 88, который может применяться для диагностики в очень ограниченном Числе учреждений, имеющих условия и разрешение для его размножения каждые 2 мес.,

фаг. 97 может готовиться l eнтpaлизor ванно, заранее в.одной из специализированных лабораторий и | ассылаться для практического использования в периферические учреждения органов здравоохранения.

Применение фага 97 приведет к со.кращению расхода питательных сред и рабочего времени на приготовление диагностического препарата, применяемого для идентификации НАГ-вибрионов серовара. Более широкое применение диагностического метода, основанного на использовании фага 97- позволит улучшить диагностику вибрионов.

Применение фага 97 в лабораторной практике исключит необходимость постановки серологических реакций, которые в настоящее время являются единственным способом идентификации НАГ-вибрионов определенных серотипов.