Штамм VIвRIо аLвеNSIS - продуцент фага Советский патент 1991 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, к биотехнологии, в частности к лабораторной диагностике Vibrio albensis.

Цель изобретения - штлмм Vibrio albensis-продуцент фага, способствующего улучшению диагностики заболеваний, вызываемых светящимися вибрионами.

Штамм V.albensis КМ-42 хранится в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-42 (9651) и характеризуется следующими культурально-морфологи- ческими, физиолого-Ьиохимическими и продуктивными свойствами.

Культурально-морфологические признаки .

В мазках из агаровых и бульонных культур, окрашенных по Граму, клетки имеют вид грамотрицательных полиморфных слегка изогнуты::: и прямых птло- чек. Подвижные (при выращивании в 0,3% щелочном агаре наблюдается помутнение столбика агара).

Рост на твердых питательных средах. На щелочном агаре (рН 7,6-7,8) вибрионы образуют через 18 ч роста при 37°С колонии правильной формы, диаметром 2 мм с влажной, блестящей поверхностью, полупрозрачные в проходящем свете.

Рост на жидких питательных средах. На щелочном бульоне - помутнение без образования пленки.

Биохимическая активность штамма. Штамм разлагает глюкозу в аэробных и

о со

ОЭ 4ь Јь

0

анаэробных условиях сахарозу, маннит с образованием кислоты без газа, расщепляет маннозу (кислота образуется в поплавке) и не разлагает арабинозу, декарбоксилирует лизин, не расщепляет аргинин, не образует сероводород, Штамм устойчив к 50 мкг/мл полимик- сина.

Отношение к гомо- и гетерологич- ным фагам. Штамм не лизируется диагностическими холерными фагами классическим холерным и эьлтор, ХДФ-3 отр., ХДФ-4 отр., ХДФ-5 отр., ТЭПВ -1,2, 3,4, 5,6, 7 - отр.

ОтноЕтение штамма к видовым диагностическим сывороткам. Штамм не агглютинируется 0-холерной сывороткой, типоспеиифическими сыворотками Огава, Инаба, RO, не агглютинируется моно- варными сыворотками других (02-056) 0-сероваров. Агглютинируется вибрион- ной сывороткой V.albensis,полученной к штамму 9651.

Антигенные свойства штамма. Штамм авирулентный для кроликов-сосунков в дозе 10 кл.

Питательные потребности. Прототроф (на среде Бхаскарана и Роули растет).

Генетические особенности штамма. Лизогенный фосфоресцирующий штамм.

Продукт, синтезируемый штаммом. Штамм продуцирует фермент люциферазу, обеспечивающей фосфоресценцию колоний и бульонной культуры, продуцент умеренного фага.

Активность (продуктивность) штамма, а также другие производственные показатели. Штамм стабильно образует фосфоресцирующие колонии на агаровой среде, продуцирует умеренный фаг в титре 2-7-10 ВОЕ/мл.

Штамм светится в темноте фосфори- v ческим блеском. Выявить свечение можно после адаптации глаз в течение 10 мин. Свечение выявляется лучше у культуры, выращенной в 1%-ной пептон- ной воде, в бульоне Мартена (рН 7,6- 7,8), ярче в пленке, после инкубирования посевов при 37°С в течение 1 сут, па агаре Мартена, в полужидком агаре. На плотных средах периферия посевов светится ярче, в посеве на секторах наблюдается свечение всего сектора.

Посев микробной взвеси из ампул лиофилизированной культуры проводят

10

, ,

,

о

636446й

на щелочной агар (рН 7,6-7,8). Повышение стабильности фосфоресценции достигается клонированием из одной ярко светящейся в темноте колонии.

Продукцию фага выявляют при посеве с индикаторной культурой Vibrio alben- sis 1193 С, депонированной в музее микроорганизмов института Микроб под номером КМ-41 (1193°С). На газоне штамма КМ-41 (М93°С) фаг 9651 формирует негативные колонии круглой формы 1-2 мм в диаметре с неровным краем, полупрозрачным центром.

Фаг высоко специфичен в отношении V.albensis. Характеристика специфичности и активности фага, приведена в табл. 1.

Пример 1. Для обнаружения спонтанной фагопродукции готовят индикаторную культуру. 0,5 мл 4-часовой бульонной культуры V.albensis 1193°C, выращенной со стрептомицином . 100 мкг/мл при 37°С, вносят в 5 мл О,7%-ного агара и засевают двухслойным методом на пластинку 1,5% агара, содержащего 100 мкг/мл стрептомицина По одной капле суточной бульонной культуры V.albensis 9651 и культуры, прогретой при 56°С в течение 40 мин,

15

20

25

наносят в виде дорожки на газон 1193 С. Учет проводят после инкубирования посевов при 37°С в течение 245

0

48 ч.

Результаты показывают, что штамм 9651 при испытании суточной бульонной культуры без прогревания и после прогревания продуцирует фаг. Оаг 9651 выявляется в виде единичных негативных колоний 1-1,5 мм или слабого просветления газона индикаторной культуры в месте нанесения фаголизата.

Пример 2. Для проверки специфичности фага 9651 проводят кон- 5 центрирование фагочастиц путем пяти пассажей фага с индикатором V.albensis 1193 на агаре и в бульоне Мартена (рН 7,6-7,8).

В качестве испытуемых используют Q 100 штаммов V.cholerae 01, 150 штаммов V.cholerae 01 группы, 13 - Аего- monas, 5 - Plesiraonas, 36 - Enterobac- teriaceae, 12 - Comamonas.

Спектр действия и специфичность фага 9651 V.albensis приведены в- табл. 2.

Из табл. 2 видно, что фаг 9651 спе- .цифически активен в отношении штаммов

ь16

V.albensis и не лизирует представителей других родов и видов.

Птамм может быть использован как продуцент фага при прямом фаготипиро- вании светящихся вибрионов. Маркеры фосфоресценции и носительство профага является селективным признаком в генетических исследованиях.

Применение фага, продуцируемого V.albensis KM-42 (9651), в идентификации V.albensis, повысит эффективность лабораторной диагностики.

Формула изобретения

Штамм Vibrio albensis KM-42 (9651) - продуцент фага.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике. Цель изобретения - получить штамм Vibrio alben- sis-продуцент фага, способствующего улучшению диагностики забопеваний, вызываемых све гящимися вибрионами. Штамм КМ-42 селектирован по признаку биолюминесценции и лизогении. Хранится штамм в музее живых культур Микроб. Штамм V.albensis КМ-42 используют как продуцент бага при прямом Лаготинировании светящихся вибрионов. 2 табл. S

Примечание. Отсутствие лизиса фагом.

Таблица 1

Таблица 2

36

12