Способ определения циркулирующих иммунных комплексов Советский патент 1984 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к способа определения циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), и может быть использовано для оценки при наблюдении за развитием и течением болезней у человека и животных, в особенности таких как болезни с диффузным поражением соединительной ткани, почек, аутоиммунные, цитопении, некоторые хронические болезни легких и сердца Известен способ определения 1ДИК по связыванию иммунным комплексом исследуемой среды С,- -фракции компле мента человека, который позволяет определять количество антиген не специфических комплементфиксирующих ЦИК l. Однако известный способ недостаточно точен, что затрудняет определение ЦИК в малых концентрациях, так как используется лишь один компонент () системы комплемента, а также сложен в учете конечного результата длителен в постановке реакции, и ело жен методическими приемами в получе нии чистой фракции что делает спо соб мало доступным. Кроме того, способ с использованием С о-фракции комплемента не позволяет одновременно в одной и той же исследуемой среде определить общую комплементарную активность сыворотки и комплемента, поглощенный ЦИК, что важно для суждения об участии комплемента в аутоиммунных реакциях Известен также способ определения ЦИК ПС антикомплементаркости сыворот ки, который основан на определении поглощения ЦИК исследуемой среды комплемента морской свинки 2j. Однако известный способ недостаточно точек, так как используется гетерологический комплемент морской свинки. Цель изобретения - повьшецие точности и упрощение способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения циркулирующих иммунных комплексов, включающему титрование компле-ментов в сыворотке крови больного и определение антикомплементарностк сыворотки по разности общей комплементарной активности и оставшегося несвязанного комплемента иммунными комплексами, титрование исследуемой сыворотки больного и определение антикомплементарности сыворотки осуществляют комплементом той же сыворотки. Способ реализуется следующим образом. Определение общей комплементарной активности сыворотки. Берут 0,05 МП исследуемой сыворотки, 0,45 мл веронал-мединалового буфера с РН 7,3 и проводят титрацию. Определяют общую гемолитическую активность в единицах комплемента по 50%-ному гемолизу сенсибилизированных эритроцитов барана (ЕД по СН) Затем определяют антикомплементарность исследуемой сыворотки. Для этого 0,1 мл исследуемой сыворотки инактивируют на водяной бане при 5(°С на протяжении 30 мин, прибавляют к ней 0,05 мл исследуемой неактивированной сыворотки (при низкой общей комплементарной активности исследуемой сыворотки добавляется 0,1 мл) и 0,35 мл веронал-мединалового буфера с РН 7,3 (при низкой комплементарной активности 0,3 мл вероналмединалового буфера). Помещают в термостат на 2 ч при 37°С. После инкуба даи опредеттлют оставшийся комплемент (ЕД по CHgg). По разности общей комплементарной активности и оставшегося несвязанного комплемента определяют антикомплементарность сыворотки, т.е. количество ЦИК. Частное от деления общей комплементарной активности исследуемой сыворотки на количество ЦИК (антикомплементарность) оценивается как коэффициент аутоим -1унизации (К) . Коэффициент аутоиммунизации находим по формуле: k где С - общая комплементарная активность сыворотки в (ЕД по CHjo); ИК - количество ЦИК (антикомплемектарность) сыворотки в (ЕД по CHjo) Пример Производим расчет, Общая комплементарная активность исследуемой сыворотки 48 ЕД, Оставшийся комплемент - исследуемой пробе на ЦИК 44 ЕД. Количество ЦИК (а.нтнкомплементарность) исследуемой сыворотки определяется путем вычета от общего уровня комплемента количества последнего, оставшегося после поглощения ЦИК:

48-44 4 ЕД.

Kq (коэффициент аутоиммунизации)

г- 12 условных ед.

По предложенному способу наличие аутоиммунного компонента определяют при величине коэффициента аутоиммунизации ниже 15 условных ед, риск развития аутоиммунизации процесса при величинах 15-20 условных ед., отсутствие аутоиммунизации и риска ее развития при величинах коэффициента бодее 20 условных ед.

Пример 1. Обследовано 20 больных с тяжелым течением бронхиальной астмы. Ни в одном случае не получено коэффициента аутоиммунизации выше 20 условных ед., а средняя величина группе 16,413,4 условных ед.

П р и м е р 2. Обследовано 18 больных ревматоидным артритом и системной красной волчанкой, ни в одном

случае не получены величины коэффициента аутоиммунизации более условных ед, при средних величинах 12,1± i3 условных ед.

П р и м е р 3. Обследовано 20 пратически здоровых взрослых лиц, где во всех случаях коэффициент аутоиммунизации был выше 20 условных ед. и в среднем составлял 24,4±2,6 условных ед.

Всего бьшо обследовано 62 больных и в 73,1% случаях было определено наличие иммунных комплексов с назначением соответствующей терапии. По известному способу возможность обнаружения иммунных комплексов составляет лишь 58-59%.

Таким,образом, предложенный способ повышает точность определения иммунных комплексов и упрощает методику определения, что делает его доступным для лечебно-профилактических и научно-исследовательских медицинских учреждений.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИШУННЫХ КОМПЛЕКСОВ, включающий титрование комплемента в сыворотке крови больного и определение антикомплементарности сыворотки по разности общей комплементарной актив-г ности и оставшегося несвязанного комплемента иммунными комплексами, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, титрование исследуемой сыворотки больного и определения антикомплементарности сыворотки осуществляют комплементом той же сыворотки.