Способ выявления патологического состояния организма Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

кой кислоты и 50 мп 0,1 М хлорида магния (рН 7,4).

Сенсибилизированные эритроциты барана, представляющие собой иммунные комплексы антиген-антитело, использовали для активации классического пути системы комплемента, эритроциты кролика - для активации альтернативного пути. Эритроциты разводили перед использованием соответствующим буфером до концентрации 10 клеток/мл. Все измерения производили с помощью лабораторного прибора для подсчета частиц Picoscal.

К 1,5 мл буфера добавляли 300 мкл исследуемой сыворотки и 7,5 мкл пензии эритроцитов. Измерение количества эритроцитов производили сразу же после смешивания всех компонентов реакции и затем через 10 мин в течение 30 мин. Реакция протекает при комнатной температуре.

В соответствии, . данными динамического измерения строили кривые кинетики лизиса эритроцитов, выражающиеся соотношением N - f(T), где N - число гемолитических единиц, соответ ствующее показаниям счетчика эритроцитов Picoscal ; Т - время исследования .

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример 1. Больной А. Диагноз: двусторонняя бронхопневмония, средне-тяжелая форма.

Кровь в количестве 50 мкл брали у детей в день исследования и центрифугировали 5 мин при 4000 g. Для опре- деления кинетики активации системы комплемента по классическому пути к

0

1,5 мл веронал-мединалового буфера, содержащего ионы кальция и магния, добавляли 30 мкл исследуемой сыворотки и 7,5 мкл сенсибилизированных эритроцитов барана в концентрации 10 клеток/мл. Измерение числа эритроцитов в смеси производили через каждые 10 мин в течение 30 мин при комнатной температуре с помощью лабораторного счетчика частиц Picoscal.

Результаты кинетического исследования системы .комплемента у больных представлены графически. Отклонение кривой Ч. от нормы составляет + 120 гем.ед., а кривой А --180 гем.ед, что свидетельствует о нарушении резервов иммунной системы у этих дете й в связи с развитием у них тяжелых воспалительных заболеваний.

Положительный эффект способа подтверждается данными, показывающими достижение цели изобретения.

25 Формула изобретения

Способ выявления патологического состояния организма путем определения активности системы комплемента по лизису эритроцитов в исследуемой сыворотке, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, сокращения времени, снижения трудоемкости способа при обследовании детей, готовят одно разведение исследуемой, сыворотки, проводят прямой подсчет количества оставшихся нелизи- рованных эритроцитов в течение 30 мин и оценивают патологическое состояние организма по отклонению полученной кинетической кривой от эталонной кривой здоровых доноров.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для динамической характеристики и прогнозирования течения воспалительных заболеваний путем оценки активности системы комплемента Целью изобретения является Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для динамической характеристики и прогнозирования течения воспалительных заболеваний. Целью изобретения является повышение точности, сокращение времени и снижение трудоемкости. Способ осуществляется следующим образом. Кровь центрифугируют в режиме 4000 g 5 мин, сыворотку сразу отделя- ют от сгустка и при необходимости хранят до использования при -70°С. повышение точности способа, сокращение времени, снижение трудоемкости. Для осуществления способа кровь центрифугируют в режиме 4000 g 5 мин. Готовят реакционную смесь, включающую соответствующий буфер, исследуемую сыворотку и взвесь эритроцитов кролика (альтернативный путь активации комплемента) или сенсибилизированных эритроцитов барана (классически . путь). Измерения производит путем периодической регистрации количества- эритроцитов, подвергающихся лизису в процессе активации системы комплемента с помощью лабораторного счетчика частиц Picoseal при комнатной температуре. В соответствии с данными динамического измерения строят кривые лизиса эритроцитов, отражающие функциональные возможности системы комплемента у здоровых и больных детей. Положительный эффект способа подтверждается клиническим материалом. I IB Для исследования кинетики активации системы комплемента по классическому пути готовили изотонический раствор вероналмединалового буфера (рй 7,4), состоящего из 2,875 г веронала, 1500 мг мединалаи 42,500 г хлорида натрия в 1,0 мл дистиллиро- ванно 4 воды, к полученному раствору добавляли 2,5 мл 1 М хлорида магния и 0,75 мл 1 М хлорида кальция. Исследование кинетики активации комплемента по альтернативному пути проводили с использованием 100 мл 0,1 М этиленгликольтетрауксусС со 00 00