Способ идентификации галофильных вибрионов Советский патент 1984 года по МПК C12N7/00 

(Л

с

СПОСОБ ВДЕНТИФИКАЦИИ ГАЛОФИЛЬНЫХ ВИБРИОНОВ путем посева исследуемого материала на питательную среду, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, идентификацию проводят методом фаготипирования с использованием фага Vibrio parahaenrolyticus 333 и/или Vibrio parahaemolyticus 375.

lN9

4i Изобретение относится к медицинс кой микробиологии, а именно к лабораторной диагностике гальфильных вибрионов. Известен способ вдентйфикации гапофиЛьнь Х вибрионов путем посева исследуемого материала на питательную среду с последующей идентифи кацией по бнохимичЁским тестам Однако известный способ трудоемкий, так как является многоэтажным и требует пересевов на ряд питатель ных сред для определения биохимической активности. Целью изобретения является упрощ ...- -- .. ние способа. Цель достигается тем, что соглас но способу идентификации галофильнык внб Е йойов путем посева исследуе мого материала на питательную среДу идентификацию проводят методом фаго типировагадя с использованием форма Vibrio parahaemolyticus 333 и/шш Vibrio parahaemolyticus 375. Фаг Vibri© parahaemoiyticus вьщелен. при исследовании краба, вылрвйенного в Севастопольской бухт Фаг Vibrio parahaetnolyticus 333 хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИВС МЗ СССР под номер Ф-104 и характеризуется следуюпщмй свойствами.. Морфологические и культуральные {свойства. . Г6лов ка вибрионов фага 333 в проекции имеет гексагональную форму размерами 613 J 63 576 t 53 А, длина отростка 126 124 1. Доверительные интервалы средних величин определены для, уровня достоверности, равного 99% (р 0,01), Фаг с коротким отростком и относится к 3 морфологической группе по класси фикации А.С. Тихоненко. . Фаг Vibrio parahaemolyticus 333 активно репродуцируется в щелочном .бульоне Мартена с.2-3% NaCI (рН 7, 7,8), при посевной дозе фага 5«10 мл среды и множественности инфекЦки - , через 3,5 ч при 35 в 1 мл среды накапливается 7 10 вибрионов. Негативные колонии фага 333 вос производятся с помощью двуслойного метода Грациа. В качестве нижнего плотного слоя используют щелочной 2% агар Мартена с 3% ЫаС1 или дру гие плотные щелочные среды для выделения вибрионов (изготовленные 31 в Иркутском ПЧИ Сибири и Дальнего Востока или в Московском институте вакцин и сывороток им. Мечникова) с повьшенной концентрацией соли. На пластинки плотного агара выливают вторым слоем смесь расплавленного и-охлажденного до 45°С 0,7% агара Мартена с 2% NaCI, 2-3 часовой бульонной культуры индикаторного штамма и 50-100 вибрионов фага в 0,1 МП среды. Через 16-18 ч при 2025°С вибрионы фага 333 образуют в мягком слое агара с ивдикаторной культурой V. parahaemolyticus 3421 круглые полупрозрачные негативные .«.. КОЛОНИИ диаметром 1,5-2 мм. При нанесении капли фага 333 на газон индикаторного штамма непосредственно на плотном агаре или в слое мягкого агара наблюдается лизис со вторичным ростом. Фаг 333 полностью нейтрализуется гомологичной сывороткой и не нейтрализуется сьгаоротками к гетерологичным фагам галофильных И других вибрионов. Фаг 333 лизирует 15% испытанных культур галофильных вибрионов не лизирует 15% испытанных культур галофильных вибрионов, не лизирующихся фагом 375 и другими фагами, специфичен и не лизирует представителей вида V. cholerae 01 и не 01 группы, а также микроорганизмы других родов и семейств; Aeromonas anaerogenes, Escherlchis coil, Pseudomonas aeruginosa. Ha этом основании фаг может быть использован для идентификации галофильных вибрионов как в составе поливалентного препарата так и для фаготипирования в качестве монофага. Фаг Vibrio parahaemolyticus 375 выделен при исследовании мидий, -выловленных в Севастопольской бухте. Фаг Vibrio parahaemolyticug 375 храрштся в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИВС МЗ СССР под номером Ф-108 и характеризуется следующими признаками. Морфологические и культзфальные свойства. Головка вибрионов фага 375 в проекции имеет гексагональную форму размером 660 37 660 ± 42 А.Длина отростка 787 i 57 А, а его диаметр 226 1 49 А. Доверительные интервалы средних величин определены для проверки уровня достовегности, равного