Штамм фага VIвRIоNIS раRанаемоLIтIсI для фагодиагностики парагемолитических вибрионов серотипа 05:К15 Советский патент 1991 года по МПК C12N7/00 

I

(21)4729980/13

(22)16.08.89

(46) 23.08.91. Бюл. № 31

(71)Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт и Новороссийская противочумная станция

(72)А.Е.Либинзон, З.И.Ус, Г.В;Галь- цева и Б.М.Дегтярев

(53) 576.8.077.5(088.8) (56) Barros I.A. et. al. Incidence of V.parahaemolyticus bacteriophages in Marine Samples. - Appl. Environ. Microbiol. 1978, v. 36, № 3, p. 492 - 299.

Авторское свидетельство СССР № 1124031, кл. С 12 N 7/00, 1978.

(54) ШТАММ ФАГА VIBRIONIS PARAHAEMO- LYTICI ДЛЯ ФАГОДИАГНОСТИКИ ПАРАГЕГЮ- ЛИТИЧЕСКИХ ВИБРИОНОВ СЕРОТИПА (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике пищевых токсикоинфекций, вызываемых морскими гало- фильными парагемолитическими вибрионами. Целью изобретения является но- вый фаг V. parahaemoiy tici Ф139О55), пригодный для определения вида и серо- типа 05:К15 парагемолитических вибрионов. Впервые выделен йаг парагемолитических вибрионов, относящийся к IV морфологической группе по Тихоненко. Фаг Ф-139 отличается от известных фагов парагемолитических вибрионов морфологией, антигенным строением, а также специфической литической активностью по отношению к вирулентным парагемолитическим вибрионам самого распространенного в СССР серологического типа 05:К15 по японской классификации. Фаг депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток МЗ СССР под номером Ф-139. Фаг Ф-139 рекомендуется использовать для видовой и типовой идентификации парагемолитических вибрионов, а также при проведении научных исследований. 1 табл.

(/

С7 1

о

СО

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике пищевых токсикоинфекций, вызываемых морскими галофильными парагемолитическими вибрионами. Целью изобретения является новый фаг V.PARAHAEMOLYTICI Ф139/155/, пригодный для определения вида и серотипа 05:К15 парагемолитических вибрионов. Впервые выделен фаг парагемолитических вибрионов, относящийся к IV морфологической группе по Тихоненко. Фаг Ф - 139 отличается от известных фагов парагемолитических вибрионов морфологией, антигенным строением, а также специфической литической активностью по отношению к вирулентным парагемолитическим вибрионам самого распространенного в СССР серологического типа 05:К15 по японской классификации. Фаг депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток МЗ СССР под номером Ф - 139. Фаг Ф - 139 рекомендуется использовать для видовой и типовой идентификации парагемолитических вибрионов, а также при проведении научных исследований. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике пищевых токси- коинфекций, вызываемых морскими гало- фильными парагемолитическими вибрионами.

Целью изобретения является новый фаг V.parahaemolytici Ф-139 (155), пригодный для определения вида и серо- типа 05:К15 парагемолитических вибрионов.

Фаг Ф-139 вьщелен из воды Черного моря, депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток Минздрава СССР под № Ф-139.

Морфологические, серологические и культуральные признаки.

При электронно-микроскопическом изучении установлено, что капсид ви- рионов фага Ф-139 имеет в проекции гексагональную Форму, размер 76,1х

х43,4 им. 1лина диаметр 22,6 чм

отростка 140,2 им,

В отчичие от известных Фаго парагсмопитнческих вибрионов предлагаемый (bar относится к IV морфологической группе по класси- (Ьикапин Тихоненко.

В тлблип е приведены размеры Фага Ф-139 в сравнении с известными фагами парагемолитических вибрионов, сви- детельствую:цне об их морфологических различиях.

О новизне (b.ira Ф-139 свидетельствуют также результат;, изучения антигенного строения:, антитела к этому фагу не нейтрализуют известные Фаги 333 и 375, а антитела к ним интактны по отношению к фагу.Ф-139.

Фаг-139 активно репродуцируется в щелочном бульоне Мартена с 2 - 2,5% NaCl (pH 7,7 - 7,8). При посевной дозе фага 310 /мл и множественности инфекции ,- 7 через 5 - 6 ч инкубации при 36 - 37 С накапливается 8-107-2-108 вибрионов.

Негативные колонии вибрионов фага- 139 воспроизводятся с помощью общеизвестного двуслойного метода Грациа на щелочных средах, содержащих 2% NaCl.

10

.Через 16 - 18 ч при 20 - 25 С в мяг- 30 ком слое агара с индикаторной культурой образуются круглые полупрозрачные негативные колонии диаметром 1,5 - 2,5 мм.

Важной особенностью Фага Ф-139 яв- 35 ляется избирательная литическая активность его по отношению к наиболее распространенному в нашей стране серо- типу вирулентных парагемолитических вибрионов 05:К15 (по японской классификации) .

Вибрионы этого серотипа являются основным возбудителем больших эпидемических вспышек пищевых токсикоин- фекций (ПТИг) в нашей стране. За три года они вызвали более 900 заболеваний .

Предлагаемый Фаг не лизировал пара- гемолитические вибрионы других серо- типов, циркулирующих на территории шей страны: 01:К32; 02:К28, ОЗгКЗЗ; 04:К8; 04.-К12; 05:К17; t)5:K47; 06:K18; 06:К46; 010:К52.

Высокую специфичность фага подтверждает также отсутствие лнгическо- о действия на других представителей

20

45

55

15

$

10

16904

семейств Vibrionaceae, Pseudumonada ceae, Enterobacteriaceae.

Фаг Ф-139 может быть чспользован для фагодиагностики наиболее распространенных в СССР вирулентных парагемолитических вибрионов серотипа 05: :К15, а также при провесении эпид- аналпза вызванных ими заболеваний.

Пример 1. Из испражнений больного пищевой токсикоинфекцией выделяют культуру, подозрительную по морфо- лого-биологическим признакам на V.pa- rahaemolyticus. Фагодиагностику этой культуры проводят следующим образом. Культуру засевают в бульон Мартена с 2% NaCl и помещают на 3 ч в термостат. 0,1 мл выросшей культуры смешивают с 5 мл расплавленного и охлажденного

до 45 С 0,7%-ного агара Мартена с 2% NaCl и выливают вторым слоем на пластинки застывшего 2%-ного агара Мартена с 2% NaCl в чашках Петри. После застывания агар подсушивают и делят на три сектора, в центр каждого наносят пипеткой каплю одного из Фагов пара- гемолитических вибрионов Ф-139, 333, 375. Посевы оставляют при 20 - 25 С. При просмотре через 18 ч на месте нанесения фага Ф-139 - зона просветле

0

5

0

5

5

ния, на месте нанесения других фагов - просветление отсутствует.

Выделенную культуру диагносцируют как V.parahaemolyticus серотипа 05:К15.

П р и м е р 2. Культуру, выделенную от больного и подозрительную на V.parahaemolyticus, изучают по методике, описанной в примере 1. Однако культура лизируется только фагом 333.

Выделенная культура диагносцирует- ся как V.parahaemolyticus. Определение серотипа может -быть проведено с помощью японского набора типирующих сывороток.

Аналогичным образом осуществляется фагодиагностика и определение серотипа культур, выделенных из воды и гид- робионтов, с помощью Фага Ф-139.

Формула изобретения

Штамм фага Vibrionis parahaemo- lytici Ф-139 (ТбнлНИИВС) для фагодиагностики парагемолитических вибрионов ротипа 05:К15.

375

Ф-105

60,8

8Я,7 22,6

liticus 3421 V.parahaemo- liticus 360