Способ диагностики функциональной недостаточности печени при вирусном гепатите Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

Предложенный способ относится к медицине и может быть использован для оценки функционального состояния печени при вирусном гепатите. Известно несколько сот способов для оценки функционального состояния печени, но считают, что важнейших функциональных проб печени лишь немногим более 30 lj . Известен способ диагностики функциональной недостаточности печени по определению холестериновых фракций в сыворотке крови хроматографическим методом. Сущность этого способа заключается в том, что липиды, экстрагированные из сыворотки крови, разделяют на стеклянных пластинках в слое крем ниевой кислоты в системе гексан -эфир-уксусная кислота (90:10:1). После проявления фракции липидов из хроматограмм переносят в парные ряды пробирок, один из которых использую для прямого метанолиза и последующе газохроматографического анализа, а другой для количественной йодометрии и определения процентного соотношени фракций липидов по йоду. О функциональной недостаточности печени при остром холецистите, инфекционном мононуклеозе, раке, циррозе печени и вирусном гепатите судят по процентному соотношению ряда жирных кислот, холестерина и других неиден тифицированных фракций стеринов 2 Однако известный способ трудоемок, включает ряд промежуточных этапов, таких как приготовление пла тин для тонкослойной хроматографии, перенос фракций липидов из хроматограмм в парные ряды пробирок, про ведение метанолиза и количественной йодометрии, газохроматографический анализ и не обеспечивает быстрой оценки фунедиональнОго состояния пе чени вследствии того, что длительн идет подготовка проб к анализу. Кроме того, для анализа требуется от 1,5 до 2,5 мл крови. Цель изобретения - упрощение и снижение травматичности способа. Поставленная цель достигается тем, что способ диагностики функциональной недостаточности печени при вирусном гепатите проводят путем исследования холестериновых фракций сыворотки крови методом тонкослойно хроматографии, при этом на хромато102граммах определяют уровень свободного холестерина и его эфира - холестероларахидоната и при повьш ении уровня холестерина с одновременным снижением уровня его эфира относи-, тельно нормы диагностируют функциональную недостаточность печени. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. 0,5 мл сыворотки крови вносят в пробирку с притертой пробкой с 10мл смеси хлороформ-метанол (2:1) и периодически перемешивают в течение 1 ч. Осадок отфильтровывают, а к фильтрату добавляют 0,2 объема дистиллированной воды, интенсивно встряхивают и оставляют в холодильнике до разделения смеси на две фазы Верхний водно-метаноловый слой отсасывают и удаляют, а нижнюю хлороформную часть смеси переносят в коническую колбу и выпаривают в вакууме при подогревании не выше 40 С. Липидный остаток растворяют в 0,5 мл хлороформ-метаноловой смеси (2:1). Полученный липидный экстракт наносят на 20 мкл в виде узкой полоски на пластинку Silufol UV-254, отступя на 1,5 см от нижнего края. Используют пластинки размером 15 см, которые резрезают на две части и на каждую из них наносят два образца липидов. После нанесения экстракта липидов, хроматографическую пластинку помещают в камеру с системой растворителей, насыщенную их парами. Камерой для хроматографии может служить стеклянная банка с притертой крышкой. В качестве системы растворителей используют смесь н-гептан-толуол (80:20). После прохождения . системы растворителей.до верхнего края, пластинку извлекают из хроматографической камеры, высушивают на воздухе и вновь помещают в каме-ру. Процесс разделения повторяют 5 раз. На каждое разделение затрачивают около 20 мин. Затем хроматограммы проявляют опрыскиванием 10%-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты И нагревают в сушильном шкафу при 80 С в течение нескольких минут до появления интенсивно окрашенных синих пятен на желтом фоне. На хроматограммах обнаруживают 6 пятен. Первое пятно соответствует сложным эфирам холестерина с насышенными жирными кислотами, второе холестеродолеату, третье - холестероллинолеату, четвертый - холестероларахидонату, пятое - сложным эфирам холестерина с кислотам и шестое (на старте) - свободному холестерину. Интенсивность окраски пятен изучаемых фракций на хроматограммах оценивают на денситометре типа BliAH в отраженном свете. Полученные количественные данные при деситометрии каждой фракции суммирую и их сумму принимают за 100%, а из полученной суммы высчитывают процентную концентрацию каждой фракции.

Пример 1. Больная А, 28 лет Поступила в инфекционную больницу на 5-й день болезни, день желтухи с жалобами на общую слабость, боли в эпигастрии, изменение цвета мочи.

При поступлении общее состояние удовлетворительное, кожные покровы и видимые слизистые желтушны. В легцих и сердце без изменений. Пульс 80 ударов в минуту, ритмичен, АД 115/60 мм рт.ст. Язык влажный, обложен серьп налетом. Живот мягкий, болезненный при пальпации в области .зпигастрии. Печень выступает из подреберья на 1,0 см. Селезенка пальпируется в положении на боку.

Во время пребывания в стационаре явления интоксикации держались 3 дня

Определяют в крови больного процентное содержание холестероларахидо вата и свободного холестерина (при поступлении, т.е. до лечения, на фоне лечения, перед выпиской и через 10 дней после выписки из стационара) которые соответственно равны: холестероларахидонат 10,20-11,69 10,15-8 12%, норма - 14,36%, свободный холестерин 20,40-1-6,88, 88-18,40-30,73%, норма - 18,83%.

Диагноз: у больной - функциональная недостаточности) печени. Допол- . нительные исследование подтвердили диагноз.

Пример 2. Больная Г, 30 лет. Поступила в инфекционную больницу i на 7 день болезни, 3-й день желтухи с жалобами, на слабость, головную боль, тошноту, потемнение мочи.

При поступлении кожные покровы, видимые слизистые и склеры глаз умеренно желтушны. В легких и сердце . . без.изменений. Пульс 78 уд/мин, АД 110/70 мм рт.ст. Язык влажный,

обложен серым налетом. Живот мягкий, безболезненный. Печень в.ыступает из подреберья на 2,5 см, болезненна при пальпации.

В стационаре явления интоксикации держсшись 10 дней.

Определяют в крови больной процентное содержание холестероларахидоната, и свободного холестерина (при поступлении, т.е. до лечения, на фоне лечения, перед выпиской и через 10 дней по.сле выписки из стационара), которые соответственно равны: холестероларахидонат 4,3210,00-11,40-9,62%, норма -14,36%, свободный холестерин 42,98-24,8624,63-28,46%, норма 18,83%.

Кроме того, общий билирубин крови изменяется в динамике заболевания и составляет 148,8-37,6-18,82о,5мкмоль/л, норма- 149 мк моль/л.

Диагноз: несмотря на нормальное содержание билирубина и трансаминаз в крови перед выпиской из стационара и через 10 дней после выписки нормализации уровня холестероларахидоната и свободного холестерина не происходит, что говорит о функциональной недостаточности, печени.

П р и .м е р 3. Больная X, 39 лет Подступила I больницу на 10-ый день болезни, 3-й деньжелтухи с жалобами на общую слабость, отсутствие аппетита, тощноту, однократную рвоту, головокружение.

При поступле.нии кожа, видимые слизистые и склеры глаз ярко желтушные. В легких без изменений. Пульс 84 уд/мин. АД 100/65 мм рт.ст. Язык густо обложен серым налетом, .влажный Живот мягкий, печень выступает на 3,5 см из подреберья, болезненна при пальпации. Пальпируется селезенка.

К 12 дня болезни наросли явления интоксикации, нарушился сон, рвота усилилась до 3-х раз в день, наросла желтушность. Явления интоксикации в стационаре держались 14 дней. У больной берут 0,1 мл крови.

Определяю в крови больной процентное содержание холестероларахидоната, и свободного холестерина (при поступлении, т.е. до лечения, на фоне лечения, перед выпиской и через 10 дней ,после выписки из стационара) которые соответственно равны: холестероларахинонат 7,14-13,18, 13,00-11,74%, норма - 14,36%, сво51128910

бодный колестерин 50,00-19,Диагноз: функциональная недоста76-31, 75-28,47%, норма - 18,83%. точность печени.

Кроме того,в динамике заболевания быстрзгю и менее травматичную оценобщий билирубин 205,2-70,1-22,2- 5 ку функционального состояния печени 11,9 мкмоль/л, норма - 14,9 мкм моль/л. при вирусном гепатите.

Способ позволяет обеспечить более

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПЕЧЕНИ ПРИ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ путем исследования холестериновых фракций сыворотки крови методом тонкослойной хроматографии, отличающийся тем, что, с целью упрощения и снижения травматичности способа, на хроматограммах определяют уровень свободного холестерина и его эфира - холестероларакидоната и при повьппении уровня холестерина с одновременным снижением уровня его эфира относительно нормы диагностируют функциональную недостаточность печени.