Способ определения тиамина в кормах Советский патент 1984 года по МПК G01N31/08 

со эо 1 1 Изобретение относится к технике количественного определения содержания тиамина (витамина В), широко применяемой при контроле качества продукции в комбикормовой промыпшенности. Тиамин является одним из биологически активных веществ премиксов, используемых для обогащения комбикормов и белкововитаминных добавок. В премиксы его вводят в количествах 200-300 г/т. В организме животных он входит в состав ферментов и играет -роль в водном, углеводном, белковом и фосфорном обмене, имеет боль шое значение для роста, развития и продуктивности. Поэтому важным моментом при контроле качества продукции является количественное определе кие содержания тиамина, для чего необходим точный, экспрессный и простой способ его анализа. Известны способы определения содержания тиамина, основанные на выделении экстракции и гидролизе фосфатных его соединений с помощью энзиматической или химической (кислотной обработки, превращения в щелочной среде придобавлении окислителя (калия железосинеродистого) в тиохром и измерении интенсивности флуоресценции flj. Наиболее близким к предлагаемому является способ определения тиамина в комбикормах, включающий экстракцию тиамина раствором серной кислоты при кипячении на водяной бане, затем тиамин переводят в тиохром окислительной смесью и флуорометриру:ют 2. . Недостатками известных способов является их продолжительность (отЗ ч и более), невысокая точность анализа, обусловленная разрушением тиамина в процессе гидролиза и неустойчивостью рабочего стандартного раствора (годен к применению в течение 2 ч). Цель изобретения - повьшение точности и сокращения времени определения тиамина. Поставленная цель достигается тем что согласно способу определения . тиамина в кормах, включающему экс- тракцию тиамина из пробы корма, перевод его в тиохром окислительной смесью и флУорометрирование, зкстрак уию тиамина из пробы корма осуществ2ляют раствором хлорида калия при соотношении от I:10 до 1:15, а флуорометрирование проводят с использованием хинина гидрохлорида или хинина сульфата. В результате экспериментальных исследований установлено, что введенный тиамин в течение 10 мин экстрагируется из навески пробы премикса 5%-ным раствором хлорида калия в соотношении от 1:1 О до 1:15. Растворы солей хинина (хинина гидрохлорнда хинина сульфата) флуоресцируют в области 320-390 нм, характерной для поглощения тиамина, переведенного в тиохром; причем интенсивность флуоресценции 1 мкг/мл соли хинина соответствует I мкг/мл тиамина, переведенного в тиохром. В связи с этим количественное содержание тиамина определяется по интенсивности флуоресценции стандартного раствора соли хинина с концентрацией 1 мкг/мл, не требующего обработка окислительной смесью. Растворы солей хинина являются неограниченно стойкимиj особенно при хранении в посуде из темного стекла. Способ осуществляют следующим образом. Пример . Берут навеску премикса массой 5 г, помещают в мернзж) колбу вместимостью 100 мл, приливают 50 мл 5%-нЬго раствора хлорида калия и встряхивают на качалке 10 мин. Затем доводят объем в . колбе до метки раствором хлорида кат ЛИЯ, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасьгоая первые 10 мл фильтрата. 1-2 мл фильтрата переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки раствором хлорида калия. Берут 40 мл разбавленного фильтрата и 40 мл изобутилового спирта в делительнзпо воронку и тщательно перемешивают в течение 2 мин. После расслоения нижний водный слой сливают в цилиндр, доводят до первоначального обьема (до 40 мл) раствором хлорида калия, перемешивают и и(ользуют для анали- за. В две делительные воронки вносят по 8 мл испытуемого раствора, приливают 6 мл окислительной смеси, перемешивают, добавляют 20 мл изобутилового спирта и встряхивают 2 мин. После расслоения нюкний слой (водный) отбрасывают, а верхний (спиртоBbifiJ фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия во флуорометрическую кювету и флуоромбтрируют, настроив предварительно при бор по стандартному раствору хинит на, 20 мл которого помещают в кювету Для гашения флуоресценции к испытуемым растворам добавляют по 12 капли (0,05 мл) концентрирован-: ной соляной КИСЛОТЫ:, перемешивают содержимое и измеряют остаточную флуоресценцию. Стандартньй раствор хинина готовят следующим образом. Навеску кристаллического хинина гидрОхлорида массой 10 мг растворяю в мерной колбе вместимостью 100 мл в 0,1 н. растворе серной кислоты. Затем берут 1 мл этого раствора и разводят 0,1 н. раствором серной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 мл (концентрация хинина гидрохлорида 1 мкг/мл). Раствор стойкий Содержание тиамина (Х) в граммах на тонну премикса рассчитывают по формуле, -A4кv. Ta-VrV -w-iOb ГПК А - йоказания флуорометра для испытуемого раствора до гашения; AJ - показания флуорометра для испытуемого раствора после гашения; - объем раствора, в котором находится навеска, мл; V, - объем раствора, взятого на окисление, мл; V2 - объем разбавленного фильт рата мл; объем фильтрата, взятый на анализ , мл , количество хинина в 1 мл стандартного раствори,мкг m - масса навески премикса, г; 72 - постоянная величина флуоресценции стандартного раствора сЬлей хинина; 10 - величины для пересчета содержания тиамина в г/т. П р и м е р 2. Берут навеску премикса массой 5 г, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, приливают 75 мл 5%-ного раствора хлорида кахшя и далее проводят анализ по П.1 примера осуществления способа. Стандартный раствор хинина готовят следующим образом. Навеску кристаллического хинина сульфата массой 10 мг растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 0,1 н. растворе серной кислоты. Затем берут 1 мл этого раствора и разводят 0,1 н.раствором серной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 мл (концентрация хинина сульфата 1 мкг/ми. Раствор стойкий. Полученные результаты испытания предлагаемого и известного способов приведены в таблице (введено тиамина в премиксы 200 г/т). I Анализ таблицы показывает, что содержание тиамина в премиксах, определяемое предлагаемым способом при соотношении массы навески пробы и экстрагента от 1:10 до 1:15, составляет 199,,3 - 201,,8 г/т, а при соотногаении 1:8 - 180,,8 г/т; при определении известным способом186,5--4,8 г/т с. отклонением в меньшую сторону до 7,0 - 29,0 г/т по отношению к введенному количеству. Использование предлагаемого способа определения тиамина в кормах позволяет повысить точность и сократить длительность анализа. Годовой экономический эффект по отрасли от внедрения способа составит 44640 руб.

-СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ -ТИАМИНА В КОРМАХ, включающий экстракцию тиамина из пробы корма, перевод его в тиохром окислительной смесью и флуорометрирование, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности и сокращения времени определения, экстракцию тиамина из пробы корма осуществляют раствором хлорида калия при соотношении от 1: 10 до 1:15, а флуорометрирование проводят с использованием хинина гидрохлорида или хинина суль фата .