Способ определения сантохина Советский патент 1979 года по МПК G01N33/16 

- Изобрегение относится к технике количественного кинетического определения сангохина (этоксихииа), щИроко применяемой при контроле качества продукции.в комбикормовой промышленности. Известны способы определения сантохина в биологических материалах (тканях животных, яйцах, молоке, масле) и кормах (люцерновой муке). К ним относятся флуорометрический и спекгрофотометрические способы. Флуорометрический рпособ основан на том, что антиоксидант обладает активной голубой флуоресценцией, измеряемой флуорометром. По флуорометрическому способу определение сангохина проводят следующим об разом. Антиоксидант экстрагируют петролейным или диэтплоБым эфиром, изооктаном, переводя его в водорастворимое состояние с помощью соляной кислоты, а затем измеряют флуоресценцию. Авторы отмечают, что при анализе биолргическо-гр материала такие соединения, как рибофлавин, фолиевая и ншсотиновая кислоты, которые входят в состав -премиксов, мешают определению, так как дают дополнительную флуоресценцию Ell Установлено, что при определении сантохина ошибка составляет 10%, а для. Нифлекса 1 (действующим веществом которого является сантохин) загрязнения доходят-до 40-45%. Кроме того, в некоторых способах используются вредные и ядовитые для человека химические реактивы, например, метанол и другие.. Известны спектрофотометрические способы определения сантохина, основанные на его экстракции и измерении оптической пло тнос ти. Известен спек трофо то метрический способ определения хлоргидроксихинолина путем экстракции его хлороформом и измерения оптической плотности при максимуме поглощения 325 нм 2 . Однако этот способ не обладает достаточной чувствительностью и точностью. Известен способ определения сантохина, который является наиболее близким к предлагаемому. Он включает следующие Приемы, экстракцию эгоксихина органическим расгворигепем (гептаном, гексаном, петролейиым эфиром), обработку 0,5н, соляной кислотой в делительной воронке и ультрафиолетовую спектрофотометрию нижиего водного слоя. При определении антиоксиданта в образцах, содержащих приме9И, например бутилгидроксианазол, осущесг вляется предварительное омыление спиртовым раствором щелочи з . Этому способу также присущи недос Т&ТКй: при определении сантохина мешают сббтавные части корма - витамины, кароТиноиды, жиры, масла и др., а предварительное омыление образца спиртовым раст ЬбрбМ едкого калия для освобождения от примесей не, решает поставленной задачи, так как При определении жирорастворимых витаминов (А, Е, И ) данный прием ана.лиза обязателен. Целью изобретения является разработка наиболее точного и ускоренного способа оПрейеленйя сантохина в кормах, содержащих большое количество биологически активных веществ органической природы, . таких, ка1с витамины, антибиотики, лекарства и другие, которые мешают опре делению сантохина. Указанная цель достигается тем, что пробу сантохина обрабатывают раствором хлористого пара-сульфофенипдиазония, который получают следующим образом; берут 0,5 мл 10%-ного раствора пара-аминобензолсульфокислоты, приготовленной пои нагревании на а5%-ной соляной кисло те 15 мл 5%-HOto раствора азотистокис лого натрия и 9,5 мл воды, после чего фотометрйруют полученное окрашенное соединение. Отличительным признаком спо соба является добавление райтвора хлорис того пара - с сульфофенилдиазония, в результате чего образуется комплекс сантохйна имеющий интенсивную красно-оран жеву. окраску. Полученный раствор фогометрируют при 345 нм. Пример применения предлагаемого способа, Навеску корма, содержащего от 1 до 25 мг сантохина, помешают в коническую колбу вместимостью 100 мл и экстрагиРУ при тщательном перемешивании порциями по 25 мл н-гексаном. Гексановый экстракт переносят в делительную воронку на 200 мл, промывают его трижды по 25 мд 0,5 н, серной кислотой После каждого расслоения нижний водный слой фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу на 100 мл доводят объем одой до метки и смешивают. (При содержании в навеске корма от 8 до 25 мг сантохина помещают 5 мл полученного экстракта в мерную колбу на 25 мл и доводят 0,5 н. соляной кислотой объем до метки). Затем в пробирки вместимостью 10 мл наливают 5 мл этого раствора и добавляют 0,2. мл хлористого пара-сульфофенилдиазония. (Последний готовят следующим образом; берут 0,5 мл 10%-ного раствора пара-аминобензолсульфокисло ты, приготовленной при нагревании на 35%-ной соляной кислоте, добавляют вначале 3 мл, а через 5 мин 12 мл 5%-ного раствора азотистокислого натрия и 9,5 мл воды). Пробирки с содержимым встряхивают, помещают, на 2 мин в кипящую водяную баню, охлаждают холодной водой -и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на фотоэлектрокалориметре с фиолетовым светофильтром (длина волны 345 нм) в кюветах с шириной рабочей грани 10 мм. Одновременно проводят пробу на реактивы. . Содержание сантохина рассчитывают по калибровочной кривой. Окрашенные раство. РЬ безличных концентраций сантохина подчиняются закону Бугера-Ламберта-Бера «ри содержании 0,01-0,10 мг/мл. Продолжительность анализа 35 мин. С целью оценки данного и известного способов был проведен анализ по определению содержания -сантохина в премиксе рецепта Пба, результаты которого приведены в табл. 1 и, 2.

Содержание сантохина в премиксе (%)

Таблица 1

Введено сангохина 1,24%

1,24.О

1,24.О

1,17,- 0,07

. 1,24О

1,33+ 0,09

-1,23- 0,01

1,24О

1,33+ 0,09

Сравнительная точность известного и ;предлагаемого ;спрс рбов

+ 0,08

-f 0,06

Ч- 0,14

+ 0,16

+ 0,05

+ О,О8

+ 0,12

f 0,14

+ 0,13

Таблица 2