Способ определения фолиевой кислоты в кормах Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

ел М

vl

:о Изобретение относится к технике количественного определения фолиевой кислоты (витамина В, птероклглутаминовой кислоты, N.1 L|t2 амино-4-окси-6--птеридил)-метил-айи .ноЗ-бензоил- L (+)-глутаминовой кисл ты),широко применяемой при контрол качества продукции в комбикормовой промышленности, 1 Фолиевая кислота является одним из биологически активных веществ п миксов, применяемых для обогащения комбикормов и белково-витаминных добавок. В премиксы ее вводят в количестве до 50 г/т, как составную чаеть ряда ферментов, катгшизирующих биосинтез некоторых аминокислот и белков в организме животных. Поэтому важным моментом при контролекачества готовой продукции является количественное определение фолиевой кислоты, для чего требуется надежный, точный и чувствительный метод. .Известно большое количество спо собов определения фолиевой кислоты в биологических материалах и кормах радиоизотопных l ; газожидкос ной и жидкостной хроматографии высокого давления 2 ,. гель -фильтрации .на еефадексе з , микробиологических 4J . Вышеприведенные способы определения фолиевой кислоты и ее производных трудоемки и длительны. Боль шая часть их предполагает применевне аппаратуры, приборов и .материа лов, выпускаемых за рубежом и небезопасных для человека., сложных в эксплуатации, неприемлемых в практической работе на предприятиях отрасли. Известен способ хроматографичес кого выделения .и флуорометрического определения фолиевой кислоты на колонках с активированной окись алюминия 5 . Известный способ определения фолиевой кислоты неточен и отличае ся низкой чувствительностью, при проверке в условиях лаборатории института не получено воспроизводи мых результатов (данные по содержанию витамина Вр завышены), ввиду несовершенства приема очистки от мешающих примесей. Цель из9бретения - повышение то ности. . ,Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения фолиевой кислоты в кормах, включающем экстракцию растворрмедкого натра, центрифугирование, очистку полученного экстракта, обработку его раствором перманганата калия, флуориметр 1Ю, очистку экстракта проводят путем осаждения раствором смеси желатина и бензойной кислоты при соотношении (г/л) 5:1-7:1. Пример . Навеску премикса массой 2 г помещают в мерную коЛбу вместимостью 100 мл; приливают около 50 мл 0,1 Н раствора едкого натрия и встряхивают на шуттельаппара.те в течение 5 мин. Затем доводят в ней объем до метки 0,1 Н раствором едкого натрия, перемешивают и центрифугируют при 700 об/мин 10 мин. Берут 50 мл центрифугата в мерную колбу вместимостью 100 мл, приливают около 20 мл дистиллированной воды, 18 мл 16%-ного раствора соляной кислоты и 1 мл осаждающего раствора (последний готовят так: 0,5 г желатина медицинского и 0,1 г бензойной кислоты растворяют при нагревании в 60-70 мл дистиллированной воды в. мерной колбе вместимостью 100 МП и доводят объем до метки водой), после чего доводят в колбе объем до метки водой, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр с синей полосой. В два стеклянных стакана вместимостью 50 мл помещают по 20 мл фильтрата и доводят рН до 3,9-4,1. К содержимому одного из стаканов добавляют по каплям 4%-ный раствор перманганата калия при перемешивании до неисчезающей розовой окраски и выдерживают в течение 10 мин; избыток перманганата калия удаляют добавлением нескольких капель 3%-ного раствора перекиси водорода, доводят рН содержимого стакана до 3,9-4,1 растворами соляной кислоты и объем раствора до 25 мл дистиллированной водрй рН 4,0. К фильтрату, находящемуся во-втором стакане, добавляют дистиллированную воду при рН 4,0 до объема 25 мл. Содержимое обоих стаканов фильтруют через бумажный фильтр с синей лентой во флуорометрические пробирки. Вышеуказанным способом готовят стандартный раствор фолиевой кислоты (окисленный и неокисленный) с концентрацией 2,5 мкг/мл в 0,1 Н раствора едкого натрия. Интенсивность флуоресцении растворов (до и после окисления) измеряют fa флуорометре со светофильтрами ФК-1 и ФК-2. ,Содержание фолиевой кислоты (X, г/т) расчитывают по формуле ... А С 100 100 -10 . IlZZlIZZHZIIZZZC-Z-ZirzZZ 1 т- 10 где. А - разность показателей флуорометра Для окисленной и неокисленной форм испытуемого раствора: f разность показаний флуорометра для окисленной и неокисленной форм стандартного раствора фолиевой кислоты; С - содержание фолйевой кислоты в 20 4л стандартного раствора, взйтое на а налиэ мкг; W - масса навески пробы, г; V, - объем центрифугата, взятый на анализ (50), мл; Vy- объем фильтрата (20), мл; 100- объемы разведений, мл; коэффициенты пересчета мкг в .г (знаменатель) иг в т (числитель). Для оценки предлагаемого и известного способов были проведены а ЛИЗЫ по определению содержания фолиевой кислоты в премиксе. Данные приведены в таблице (введено фолиевой кислоты в премикс 50 г/т). результаты таблицы показывают; что содержание фолиевой кислоты в премиксах, определяемое предлагает мым способом, составляет 50,4 г/т, при анализе известным способом составляет 70,9 г/т с отклонением в большую сторону почти на 42%, т.е. точность повышается в 1,5 раза. Следовательно, предлагаемый способ .определения фолиевой кислоты является наиболее точным и может для объективной оценки кародукции на предприятиях мовой промышленности. вая кислота, мг/г, по способу Известному гаемому ff,0 7,2 5,0 70,9±1,8 50,4tO,6

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОЛИЕВОЙ КИСЛОТЫ В КОРМАХ, включающий экстракцию раствором едкого натра, центрифугирование, очистку полученного экстракта, обработку его раствором перманганата калия, флуориметрию, О. тличающийся тем, что, с целью повышения точности, очистку экстракта .проводят путем осаждения раствором смеси желатина и бензойной кислоты при соотношении (г/л) 5:1-7:1. (Л