Штамм @ @ СВБК 141 @ -универсальный реципиент для генетической идентификации культур @ @ @ @ Советский патент 1984 года по МПК C12N15/00 C12Q1/04 

11 Изобретение относится к микробио.логии и может быть использовано для идентификации возбудителя мелиоидоза и сапа. Известен комплект микро.организмов для генетической индикаци микроорганизмов LИ Однако известный .комплект штаммов .не содержит индикаторного штамма на Pseudomonas. Известен штамм Pseudomonas pseudomallei С141 - прототроф 2j Однако данный штамм не молсет быть использован в трансформации в качестве реципиента ВВИДУ отсутствия селективного маркера. Целью изобретения является подбор штамма универсального реципиента доя генетической идентификации культур Pseudomonas pseudomonallei и Pseudomonas mallei от других видов бактерий. Поставленная цель достигается с помощью штамма Pseudomonas pseudomal lei СВБК 141 pur. Штамм Pseudomonas pseudomallei СВБК 14.1 .pur (коллекция Музея живых культур Института Микроб, коллекци онный номер СВБК 141 pur) получен методом селекционного отбора и характеризуется следующими признаками Культурально-морфологические приз наки. Клетки прямые, палочковидные. Величина клеток, двухсуточной культу ры бактерий, выросших на мясопептон :ном глицериновом агаре (0,5-0,8) х (3,0-5,0) м.к. Подвижные, лофотрихи спор и капсул не образуют, грамотрицательные,. На мясопептонном глииериновом бульоне через 1-2 суток растет диффузно, образуя придонный осадок и н поверхности нежную пленку. Физиолого-биохимическне признаки Факультативный анаэроб.Оптимум роста при 32-34 0. На средах с глюкозой, лактозой, мальтозой, кcIiлoзoй осуще ствляет окисление без ферментации с сдвигом рН в кислую сторону. Лизин не декарбоксилирует, аргинин деарбоксилирует активно через 24 часа с сдвиго.м рН в щелочную сторону. Гидр лизует желатин. Индол и сероводород не образует. Гемолизирует эритроциты барана на четвертые сутки. Штамм Pseudomonas pseudomallei СВБК 141 pur - ауксотрофен по гипоксантину. Обладает естественной 2 компенентностью. В тестах трансформации по маркеру ауксотрофности с хлороформированными бульонными культурами (хлороформенными лизатами) диких штаммов Pseudoiponas pseudomallei и .Pseudomonas mallei дает высокий уровень частоты трансформации авирулентен. П р и м е р . С целью проверки возможности генетической идентификации культур Р.pseudomallei и Р,mallei от других видов бактерий с помощью универсального реципиента Pseudomonas pseudomallei СВБК 141 pur испытаниям подвергают 15 видов Pseudomonas (цо одному штамму каждо.го вида) 5 штаммов E.coli, 2 штамма Pseudomonas, 2 штамма Shigello, 1 штамм Staphylococcus anreus, 2 штамма I.pestis, 5 штаммов р.malleiи 5 штаммов Р. pseudomallei (всего 37 штаммов-доноров), а также универсальный реципиент Pseudjmonas pseudomallei СВБК 141 pur. . До проверки все испытуемые штаммы, кроме универсального реципиента, были зашифрованы произвольными цифровыми обозначениями. Кроме этого, были приготовлены и зашифрованы три культуральные смеси.. Исследуемые культуры бактерий высевают на Z-бульон (5 мл) и культивировали при 34 С в течение 48 ч. Затем бульонные двухсуточные культуры бактерий хлороформируют (т.е. эмульгируют с двумя мл хлороформа до получения жидкости молочного цвета).. Хлороформированные культуры бактерий на 2 ч помещают в термост-ат, а затем переносят в холодильник (для удале-. ния паров хлороформа и его полного осаждения), Хлороформенные лизаты проверяют на стерильность: высевают материал по О,1 мл на поверхность Zагара. Идентификацию культур бактерий проводят следующим образом. Готовя.т смеси реципиантной культуры с исследуемым ЛИЗатом в равных объемах (обычно по 1 мл) и высевают их йа минимальную среду по О,1 мл. Чашки с -посевами инкубируют 45 суток. На чашках с посевами универсального реципиента просматривается фоновьй рост, образованный ауксотрофными клетками и наблюдается появление колоний прототрофных клеток (рекомбинантов), которые появляют311319024

ся в результате генетической трансфер- Использование штамма Fseudomonas нации при совпадении по гомологии до- pseudomallei СВБК 1Л1 pur универсальнорного материала (ДНК в хлорофор- ного реципиента применении метоменных лизатах) с реципиентньпш куль- да генетической трансформации позвотурами..5 ляет отдифференщфовать культуры

Использование СЗБК 141 pur Pseudomonas pseudomallei и Pseudomoпозволяет выявить 100% идентифици- nas mallei от других видов бак руемых культур бактерий. . терий.

Штамм Pseudomonas pseudomallei СВБК 141 pur (Музей живых культур Института Микроб) универсальный реципиент для генетической идентификации культур Pseudomonas pseudoraallei и Pseudomonas mallei.