Октадекан-7-спиро-2 @ -( @ -оксил-4 @ 5 @ -5 @ -триметил- @ 3-имидазолин)овая кислота или ее этиловый эфир в качестве нитроксильного зонда для изучения липид-белковых комплексов Советский патент 1985 года по МПК C07D233/26 

Изобретение относится к новьм хи мическим соединениям, а именно к ок тадекан-7-спиро-2-(Ы-оксил-4 ,5% 5 -триметил-йЗ-имидазолин) овой кислоте или ее этиловому эфиру общей формулы г 3 %(Hj,),)5COOR где R Н, в качестве нитроксильного зонда для изучения липид-белковых комплексов Известны производные жирных кислот с 1,3-оксазолиденовым нитроксил ным фрагментом формулы НзС. СНз СНз(СН2)|п С (CH JnCOOR используемые в молекулярной биолог в качестве нитроксильных зондов Q Недостатком указанных соединени является труднодоступность как их. мих, так и 2-амино-2-метш1Пропанола- исходного соединения в их синтезе, а также неустойчивость пр низких значениях рН, Наиболее близким к изобретению являются производные 2,2,5,5-тетра метил-ДЗ-имидазолин-1-оксила /{2 , характерной особенностью которых является устойчивость при низких значениях рН з, : Однако эти соединения вследствие своей гидрофильности и отличия стру туры от.структуры природных соедине ний не находят применения в качестве нитроксильных зондов для изучения липид-белковых комплексов. Цель изобретения - поиск соединений с кислотоустойчивым имидазолиновым нитроксильным фрагментом, пригодных для исследований липидбелковых комплексов. Поставленная цель достигается октадекан-7-спиро-2 -(Ы-оксил-4, 5 ,5 -триметил-АЗ-имидазолин)овой кислотой или ее этиловым эфиром об щей формулы J в качестве нитроксил ного зонда для изучения липид-белковых комплексов. Указанные соединения получают конденсацией этилового эфира 7-кетостеариновой кислоты с гидрохлоридом З-гидроксиламино-З-метилбутан-2-она в в присутствии ацетата аммония в метаноле с последующим окислением диоксвдом свинца и при необходимости щелочным гидролизом полученного этилового эфира. Пример 1. Этиловый эфир октадекан-7-спиро-2 -(Н-оксил-4,5 , 5 -триметил-|ХЗ-имидазолин)овой кислоты (iS) . Смесь 2,8 г (8,58 мМ) этилового эфира 7 кетостеариновой кислоты, 1,97 г (12,87 мМ) гидрохлорида 3гидрокс11памино-3-метип-бутан-2-онаи 1,98 г (27,54 мМ) ацетата аммония в 100 мл метанола кипятят в течение 30 ч. Реакционную смесь упаривают досуха и распределяют между 100 мл бензола и 100 мл-насыщенного раствора , бензольный слой промывают водой, сушат Na SO и отфильтровывают. Полученный бензольный раствор перемешивают с 7 г PbOj в течение 6 ч. отфильтровывают, фильтрат концентрируют. Маслообразный остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируя смесью петролейный эфир - эфир. Вьщеляют 2,08 г не вступившего в реакцию этилового эфира 7-кетостеарииовой кислоты и 0,53 г целевого продукта в виде темно-желтого масла. Выход 58% (в расчете на вступивший в реакцию этиловьй эфир i кетокислоты). - ИК-спектр (): 1740 (), 1645 (). Масс-спектр (т/с): 423 (М). ЭПР-спектр: а( 1,45 мТ (в этиловом спирте), 5,0 «Ю спин/моль. . Найдено, %: С 70,64; Н 11,93 N 6,54, %%М,Оз Вычислено, %: С 70,92, Н 11,11, N.6,b2. Пример 2. Октадекан-7-спиро-2(Ы-оксил-4,5 .5-триметил-йЗимидазолин)овая кислота (1о1,). Раствор 170 мг соединения 15 и 0,05 г NaOH в 10 мл этанола выдерживают 10 ч при 60°С. Смесь упа- ривают до 1/2 первоначального объема, переносят в делительную воронку, подкисляют 0,5н раствором НС-6 дорН 3,0 и экстрагируют хлороформом. Экстракт промывают водой, сушат Na,SOU отфильтровывают и упаривают. Получают 142 мг (95%) кислоты (Ю) в виде темно-желтого воскообразного вещества. ИК-спектр (см ) : 1715 (), 1645 (), ЭПР-спектр, ацМ,45 мТ (в этиловом спирте), 5,2«10 спин/ моль. Найдено, %: С 69,45; Н 10,98; N 6,98 .O, %:, С 69,87; Н 10,89; Вычислено, 7,08. Для изучения пригодности предлагаемых соединений в качестве нитроксильного зонда было изучено- их встраивание в сывороточный альбумин Для этого в 100 мкл раствора человеческого сывороточного альбумина в изотоническом растворе NaCl, соде жащем 10 мМ трис-НСб -(рН 7,0), вводили 1 мкл раствора исследуемого со динения в этаноле. Конечная концент рация зонда в образце составляет 10 М, альбумина - 15 мг/мл, этанола - 1 об.%. Исследования проводи ли как при рН 7,0, так и при рН 2,5 для чего образец с рН 7,0 подкислял Из формы полученных спектров ЭПР. определяли ряд параметров, позволяющих судить о структуре микроокружения зондов: значения тензоров сверхтонкоТ;, И Т И параметр го расщепления , характеризуюпщй степень h встраивания эонда в исследуемый объект. Параметры спектров ЭПР соединений TO и IS, встроенных в сывороточный альбумин, приведены в таблице. - Анализ полученных данных позволяет сделать вьшод о том, что предлагае- мые соединения встраиваются в альбумин и могут, таким образом, быть использованы в качестве нитроксильных зондов для исследования липид- белковых комплексов. Устойчивость предлагаемых соединений при низких значениях рН (в отличие от соединений с 1,3-оксазолидиновым нитроксильным фрагментом) позволяет использовать их для биологических исследований, проводимых в кислой среде. Достоинством предлагаемых соединений является также легкодоступность исходного соединения в их синтезе-гидрохлорида З-гидроксиламич

Октадекан-7-спиро-2 -(N-оксил4 ,5 5 -триметил-йЗ-имидазолин)овая кислота или ее этиловый эфир общей формулы СНз сн, СН: N-0 l3(H2)io-C-(CH2)5COOR где R Н, , в качестве НИТРОКСИЛЬНОГО зонда для (Л изучения липид-белковых комплексов.