Штамм @ @ ЛУ-122-продуцент декстрана,обладающего иммуностимулирующим действием Советский патент 1986 года по МПК C12P19/08 C12P19/08 C12R1/00 

4 00

00 1 Изобретение относится к микробиологической прОмьшшенности и касается получения декстрана, обладающего иммуностимулирующим действием. Известен щтамм Leuconostoc mesenteroides СФ-4 - продуцент декстрана, обладающего иммуностимулирующим действием. Однако известный штамм продуцирует, декстран, обладаюдасй слабым иммуностимулирующим действием. Цель изобретения - штамм, продуцирующий декстран с повышенным иммуностимулирующим действием. Эта цель достигается с помощью .штамма Leuconostoc dextranocum ЛУ-12 Штамм Leuconostoc dextranicum Лу-122 выделен с плодов виноградаi Депонирован по Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под номером ВКМ В1526Д и характеризуется следующими признаками. Культурно-морфологические признаки. Мелкие кокки 0,5-0,6 1,2-1,6 мкм собраны в пары или цепочки по 3-8 клеток. Грамположительны. На средах, содержащих сахарозу, образуют слизистую капсулу, неподвижные. На.среде, содержащей 0,5 г дрожжевого экстракта, 0,25 г триптона, 0,25 г K,jHP04, 10 г глюкозы, 2 г агара и 100 мл дистиллированной воды образует гладкие серовато-белые округлые колонии диаметром 0,7-1,0 мм На среде того же состава с 2 г сахарозы (без глюкозы) образует сли зистые, мутно-белые полусферические колонии диаметром 1,5-2,0 мм. Физиолого-биохимические признаки Аэроб. Оптимум температуры 23 . Оптимум рН среды 7,0-7,2. Растет на средах, содержащих пептон, дрожжевой автолизат и витамины На -картофеле не растет, Крахмал не гидропизует. Перекись водорода не разлагает. Желатину и агар не разжижает. Глюкозу, сахарозу, фруктозу, маннозу сбраживает до кислоты. Не сбраживает маннит и сорбит. Усваивает без образования кислоты арабинозу, ксилозу, мальтозу, лактозу, галактозу, мелецитозу, рафинозу Пример. Для получения декстрана 20-30 мл живой культуры перено782сят в среду следующего состава, г: KCf-0,1; 0,1 j КН2Р04 1,75; 12HjO 4; P 0,5; Fe(NH4), 504- 0,01; парааминобензойная кислота 0,05; пептон 1,0; дрожжевой автолизат 0,1 мл, сахароза 100; дистиллированная вода до 1л; рН среды доводят до 7,2 с помощью 1Н. NaOH и выращивают при 25°С 48-72 ч. В процессе выращивания рН среды падает до 4,2, что является признаком окончания биосинтеза. Для выделения декстрана культураэтьную жидкость разводят водой в два раза, добавляют этанол до концентрации 25% по объему и смесь оставляют в холодильнике на 3 ч. Смесь центрифугируют (1800 g 30 мин) осадок отбрасывают, к раствору добавляют этанол до концентрации 40% по объему и оставляют на ночь в холодильнике. Бьтавший в осадок декртрана отделяют центрифугированием, промывают 40%-ным этанолом, дважды переосаждают и высупшвают лиофильно. Выход составляет 15-20 г /30-40%/ от теоретического. Полученный декстран хорошо растворим J8 воде. В концентрации 1-5% дает голубоватьй опалесцирующий раствор. Удельное вращение / d / (С 1,0 в формамиде). При полном гидролизе образуется только глюкоза. По данным метилирования и С-ЯМР75% глюкозных спектроскопии содержит ot -1,6-гликоостатков, соединенных зидными связями и 25% глюкозных остатков, соединенных оь -1,2-гликозидными связями, расположенными в точках ветвления молекулы. Проверку.иммуностимулирующего действия декстрана проводят по двум критериям, 1. Увеличение фагоцитарной, активности макрофагов. Декстран в дозе 0,2 мг вводят внутрибрющинно бельм мьш1ам весом 1820 г. Через 1,3,5 и 10 сут макрофаги брюшной полости извлекают и инкубируют с суточной культурой Staphyfococcus . На каждьй срок берут 5 подопытных и 5 контрольных животных. Через 3 сут, после инъекции декстрана наблюдают увеличение фагоцитарной активности макрофагов в 3,9 раза по сравнению с контролем. Фагоцитарный индекс возрастает в тот же срок в 4,6 раза. 2.Увеличение неспецифической резистентности к инфекции. Декстран вводят внутрибрюшинно белым мьппам весом 18-22 г по 0,4 мг в 0,2 мл физиологического раствора. Контрольной группе мышей вводят физиологический раствор в том же объеме. Чере 24 ч обе группы мышей заражают патогенным штаммом кишечной палочкц E.coti 094 в дозе, вызьюакидей гибель 95% животных в контрольной группе. Гибель животных наблюдают в течение 5 сут. В опытной группе из 110 мышей выжило 85, погибло 25. Процент выживав мости в этой группе 77±4%. 784 В контрольной группе из 90 мьппей выжило 4, погибло 86. Процент выживания в этой группе 4+2%. Проверка влияния полученного и иэвестного декстранов на неспёцифическую резистентность к инфекции у мышей показывает, что выживаемость мышей под действием полученного декстрана увеличивается на 19% (25+2% против 6i1% прототипа). Использование изобретения позволяет повысить иммунологическую активность декстрана, а также его выход.

Штамм Leuconostoc dextranicum Лу-122 ВКМ В1526Д (Всесоюзная коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) - продуцент декстрана, обладающего иммуностимулирующим действием.