ШТАММ БАКТЕРИЙ GLUCONOBACTER OXYDANS - ПРОДУЦЕНТ БАЛИЗА Российский патент 1995 года по МПК C12P1/04 C12N1/20 A61K35/74 

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новый штамм микроорганизмов - продуцент лекарственного препарата бализ, применяемого в медицине и ветеринарии.

Известен штамм бактерий Gluconobacter oxydans-01 (ВКПМ В-2380), используемый для получения препарата бализ, применяемого для профилактики и лечения гастроэнтеритов поросят в виде водного раствора [1].

Однако этот штамм обладает недостаточно высокой окислительной активностью, способен накапливать за 72 ч ферментации 2,6% бализа [2].

Целью изобретения является выявление штамма Gluconobacter oxydans ВКМ В-1974 Д, обладающего более высокой окислительной активностью и выходом препарата бализ.

Предлагаемый штамм обнаружен на перезревших плодах винограда, произраставшего в Анапском районе Краснодарского края.

Штамм имеет следующую характеристику:
Культурально-морфологические признаки.

Клетки суточной культуры на среде следующего состава, г: дрожжевой автолизат - 50,0 г (жидкий), пептон 3, маннит 25, вода дистиллированная до 1 л, имеют размеры (0,8-1,1)х(1,5-3,7) мкм. Клетки двенадцатисуточной культуры на агаризованной среде вышеуказанного состава имеют размеры (0,7-1,4)х(1,4-4,2) мкм. Форма клеток элипсоидальная. Встречаются поодиночке, парами и цепочками. Подвижные. Движутся при помощи полярно расположенных жгутиков. Споры не образуют. Грамотрицательные.

Агаризованная среда с маннитом. Колонии круглые. Диаметр колоний 3-9 мм. Блестящие. Поверхность гладкая, структура мелкозернистая, консистенция маслянистая. Равномерно эмульгируются в воде. Цвет колоний кремоватый или кремовый.

Сусло-агар. Колонии круглые, блестящие, поверхность гладкая, профиль изогнутый, край гладкий. Цвет - розовато-кремовый. Консистенция маслянистая. Равномерно эмульгируются в воде. Диаметр колоний до 8 мм. При рН среды выше 6,0 встречаются колонии гладкие и шероховатые. Шероховатые колонии могут иметь форму круглую, круглую с фестончатым краем, неправильную концентрическую, складчатую. Край таких колоний гладкий или волнистый. Профиль изогнутый. Оптические свойства - матовые. Консистенция маслянистая или слегка вязкая.

Картофельный агар. Колонии круглые и круглые с фестончатым краем. Диаметр до 6,5 мм. Блестящие, поверхность гладкая. Профиль изогнутый, край гладкий, структура мелкозернистая, цвет беловато-кремоватый или кремовый. Равномерно эмульгируются в воде.

Среда Захарова (полная). Колонии круглые, блестящие, поверхность гладкая. Край гладкий, профиль изогнутый. Цвет колоний светло-коричневый по центру, кремовый по краю. Консистенция маслянистая. Равномерно эмульгируются в воде. Диаметр колоний до 3,2 мм.

Рост на пиве и сахарозе обильный, при этом среды из пива и сахарозы не загустевают. На среде с пивом пленки в течение 7 сут не образуется. По стенкам пробирки наблюдается кольцо из прикрепленных к стеклу клеток.

Рост на моркови умеренный. Штрих от темно-бежевого до светло-коричневого цвета, блестящий, распространяется от центра по волокнам моркови. Консистенция маслянистая.

Рост на картофеле умеренный, штрих бледно-кремового или кремового цвета. Налет сплошной, блестящий. Консистенция маслянистая.

Физиолого-биохимические признаки.

Оптимум рН 5,0-5,5. Рост в пределах рН 2,5-7,1. Оптимальная температура роста 28^оС. Строгий аэроб. Каталазоположителен. Желатину не разжижает. Окисляет этанол до уксусной кислоты при рН 4,5, реакция средняя. Не окисляет уксусную кислоту и лактат до СО₂.

Окисляет глюкозу до глюконовой кислоты. 2-кето-глюконовой кислоты, 5-кето-глюконовой кислоты и 2,5-дикетоглюконовой кислоты.

Не гидролизует крахмал и лактозу. Образует коричневый пигмент, способный к диффузии (культура штрихом на чашке Петри. Питательная среда: глюкоза - 2,5%, КН₂РО₄ - 0,01%, дрожжевой автолизат 3%, СаСО₃ 3%, агар 1,5%).

Отношение к углеводам. Усваивает с образованием кислоты глюкозу и арабинозу. Не образует кислоту при использовании рамнозы, сахарозы, мелибиозы, мальтозы, лактозы, фруктозы, рафинозы.

Отношение к спиртам. Усваивает без образования кислоты инозит, сорбит, маннит, дульцит, глицерин.

Индол, сероводород не образует. Крахмал не гидролизует. Реакция на цитрохромоксидазу отрицательная. N-ацетиламино-глюкозу не окисляет.

Пример использования штамма. В стеклянные сосуды емкостью 100 л помещают 65 л питательной среды, содержащей 4% глюкозы, 0,01% КН₂РО₄ и 0,5% жидкого дрожжевого автолизата с содержанием 350-500 мг.% аминного азота. В питательную среду вносят посевной материал 24-часового роста в количестве 0,5% по объему. Ферментацию ведут в течение 72 ч при подаче воздухе 150 л в 1 мин. Ежесуточно проверяют содержание бализа в культуральной жидкости.

Результаты сравнительной эффективности штамма Gluconobacter oxydans-01 (ВКПМ-2380) и Gluconobacter oxydans-02 (ВКМ В-1974 Д) представлены в таблице.

Таким образом, предлагаемый штамм бактерий обладает повышенной окислительной активностью. Его использование в качестве продуцента способствует ускоренному накоплению бализа в культуральной жидкости и к концу ферментации повышает выход бализа на 19%.

Использование: биотехнология, штамм микроорганизмов, продуцент, лекарственный препарат, бализ. Сущность изобретения заключается в выявлении штамма бактений Gluconobacter oxydans ВКМ В-1974 Д, обладающего более высокой окислительной активностью и способностью увеличить выход препарата бализ на 19% в сравнении с известным производственным штаммом Gluconobacter oxydans ВКПМ В-2380. 1 табл.

ШТАММ БАКТЕРИЙ GLUCONOBACTER OXYDANS - ПРОДУЦЕНТ БАЛИЗА.

Штамм бактерий Gluconobacter oxydans ВКМ В-1974 Д - продуцент бализа.