Способ оценки иммунологического статуса больного Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

1 . Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным исследо ваниям крови, и может быть использовано для оценки Т и В систем лимфоцитов. Известен способ оценки иммунологического статуса больного путем исследования популяций Т и В-лимфоцитов, включающий проведение реакции розеткообразования р1. Однако известный способ не позволяет осуществлять оценку функционального состояния субпопуляций лим фоцитов и Tejd самым является неточным. Целью изобретения является повышение точности оценки иммунологичес кого статуса. Указанная цель достигается тем, что согласно способу оценки иммунологического статуса больного путем исследования лимфоцитов в реакции розеткообразования, перед постановкой реакции розеткообразования лимфоциты окрашивают 0,05%-ным раствором П-нитроТетразолия синего, а оценку осуществляют по количеству розеткообпазующих субпопуляций, лим фоцитов и их функциональной актирности. Способ осуществляется следукнцим образом. Дпя постановки реакции берут |лимфоциты, вьщеленные из гепаринизи рованной венозной крови (1-3 мл) в градиенте плотности, равном 1,08. Дважды отмывают средой 199, концент рацию лимфоцитов доводят после подсчета в камере Горяева до 2-10 в/м В две пробирки наливают по 0,01 мл взвеси лимфоцитов и смешивают с равным объемом 0,05%-го раствора П-нитротетразолия синего, приготовленного на фосфатном буфере рН 7,27,4 и инкубируют 1 ч при 37°С. Затем клетки осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/ми надосадочную жидкость убирают, объе доводят до исходного (0,1 мп) средой 199 и осадок ресуспензируют, Перед постановкой реакции розеткооб разования проводят тест на жизнеспо собность лимфоцитов 1%-ным водным раствором эозина. Процент жизнеспособных клеток составляет 95-98%. Далее реакции розеткообразования с эритроцитами барана и с эритроцитами, покрытыми антителами и комп2лементом (ЕАС-розетки) проводят как в известном способе. Количественную оценку ведут по числу розеткообразующих клеток на 100 лимфоцитов, качественную - по числу гранул восстановленного форма ана в розеткообразующих клетках (подсчет велся в 50% розеткообразующих клеток). Используемьй краситель П-нитротетразолий .синий, химическая формула С, N gOgClj , мол. м. 817,66 (Реанал, Венгрия), соль тетразолия, используемый в гисто- и цитохимических исследованиях для выявления дегидрогеназ в присутствии определенного субстрата окисления (сукцинат, лактат, глицерофосфат натрия и др.). Предлагаемая реакция проходит в бессубстратной среде, поэтому свидетельствует о суммарной активности многих ферментов, ведающих окислением. Предлагаемая концентрация красителя в растворе 0,05% является оптимальной, так как при проведении серии опытов по титрованию необходимой концентрации отмечено, что концентрация, 0,04% слабо .окрашивала клетки, а концентрация 0,06% приводила к снижению их жизнеспособности, хотя окраска была так же выражена, как и при 0,05%. Пример. Больной С.Е., 9 дн., находился в городской детской больнице № 1 с диагнозом пузырчатка новорожденных. Постгипоксическая перинатальная энцефалопатия, синдром повышенной нервно-рефлекторной возбудимости средней тяжести. Ребенок поступил На второй день болезни. Проводились иммунологические исследования . Концентрация иммуноглобулина 14/4 ag-Q 800 мг, %,3gM 144 мг/%, JgA - следы. Содержание Т-лимфоцитов (Е-РОК) 67%, В-лимфоцитов 25%. Функциональная активность Т-лимфоцитов 18,84, активность В-лимфоцитов 25,3 гранул в клетке,при этом количество розеткообразующих Т-клеток (ЕА-РОК) 67%, ЕАС-РОК 23%, жизнеспособность клеток перед постановкой теста розеткообразования 97%. Проведенные исследования показывают высокую метаболическую активность как Т, так и В-лимфоцитов. Причем активность В-лимфоцитов выше, что подтверждает острую фазу заболе3 , 11460 вания и свидетельствует об активном процессе антителогенеза. На основании проведенных исследований можно предположить благоприятный исход заболевания. Всего обследовано 30j детей с различной патологией (сепсис, пиелонефрит, пеомерулонефрит, бронхиальная астма, острые респираторчые инфекции) . Таким образом, предлагаемый спо-ю соб позволяет осуществлять как количественную, так и качественную оцен524ку иммунологическогостатуса больного, т.е. оценить состояние напряженности клеточного и гуморального звеньев иммунитета в различные фазы заболевания по функциональной активности иммунокомпонентных клеток, Кроме того, способ позволяет вйявлять вторичные иммунопатии, связанные с теми или иными энзиматическими дефектами. Все это позволяет повы- сить точность оценки иммунологического статуса больного.

СПОСОБ ОЦЕНКИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА БОЛЬНОГО путем исследования лимфоцитов в реакции розеткеобразования, отличающийся тем, что, с целью повьнпения точности способа, перед постановкой реакции розеткообразования лимфоциты ок- рашивают 0,05%-ным раствором П-нитротетразолия синего, а оценку осуществляют по количеству розеткообразующих субпопуляций лимфоцитов и их функциональной активности.