Способ определения иммунологического статуса у больных лимфогранулематозом Советский патент 1986 года по МПК A61K39/00 A61K45/08 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии.

Цель изобретения - повышение точности определения иммунологического статуса больных в активной фазе заболевания.

Указанная цель достигается тем, что лимфоциты, выделенные из периферической крови пациента, разделяют на 2 пробы и инкубирует их с левамизолом в концентрации 1 пг/мл и 10 мкг/мл. Затем проводят реакцию Е-розеткообразования, подсчитывают по- казатели в каждой пробе, вычисляют разность показателей между второй и первой пробами и при положительном значении разности определяют нарушение иммунологического статуса, а при отрицательном значении - отсутствие нарушения статуса.

Способ осуществляют следующим образом.

Из исследуемой периферической крови человека выделяют лимфоциты путем центрифугирования в градиенте плотности раствора фиколла-верографина, отмывают лим- фоциты растворов Хенкса.

Выделенные лимфоциты разливают в 6 пробирок по 0,1 мл (2X10 клеток в 1 мл). В первую пару пробирок добавляют стандартный раствор среды 199 по 0,1 мл (конт- рольная проба), во вторую пару - по 0,1 мл раствора левамизола на среде 199 в концентрации С| 1 пг/мл, а в третью - по 0,1 мл раствора левамизола на среде 199 в концентрации С2 10 мкг/мл. Пробы инкубируют при 36-37°С в течение 30-35 мин. После этого лимфоциты.используют в реакции спонтанного Е-розеткообразования с эритроцитами барана при 4°С для определения числа Е- РОК. Во всех пробах с помощью светового микроскопа считают количество Е-РОК на 100 лимфоцитов, т. е. Е) - контроль, Е(С1) и Е(с2) - для проб с левамизолом в меньшей и большей концентрациях соответственно. Затем вычисляют разность между количеством Е-РОК, соответствующим каждой дозе левамизола, и количеством Е-РОК контрольной пробы:

ДЕ(,1) Е(С1)- ) - разность для первой дозы;

ЛЕ(2) Е(С2) - E(jt) - разность для второй дозы.

После этого определяют характер приращения для разностей Е-РОК при меньшей и большей концентрациях левамизола по соотношению

ДЕ,

ДЕ|

lgC2-lgC,

При этом , если значение разности Е-РОК уменьшается, и , если значение разности Е-РОК увеличивается при повышении концентрации левамизола.

Пример 1. Больная Р-на Г. Н., 1966 года 55 рождения, история болезни № 7049, находилась в гематологическом отделении клиники НИИМР АМН СССР с 28.11.80 г. по 20.02.81

5

0

Q 0

0

5

с диагнозом лимфогранулематоза IA стадии с поражением подключичных лимфоузлов справа. Поступила с жалобами на увеличение лимфатических узлов справа под ключицей. Больна с 1978 г. В августе 1980 года после биопсии установлен диагноз лимфогранулематоза (узелковый склероз).

До начала терапии у больной брали из локтевой вены 5-7 мл крови в 0,7-1 .мл 2,7%-ного раствора динатриевой соли этилен диаминотетраацетата. Лимфоциты из крови выделяли путем центрифугирования в градиенте плотности фикол-верографина.

Для постановки реакции в 3 группы пробирок (по 2 пробирки в каждой группе) наливали по 0,1 мл суспензии лимфоцитов (2X10 клеток в 1, мл) Далее в первую группу пробирок наливали по 0,1 мл среды 199 (контрольные пробы), во вторую - по 0,1 мл левамизола в концентрации 1 пг/мл, в третью - по 0,1 мл левамизола в концентрации 10 мкг/.мл. Затем пробы инкубировали при 36-37° в течение 30-35 мин, после чего клетки отмывали дважды средой 199 путем центрифугирования при 200 g 5 мин. Надосадочную жидкость сливали, а осадками лимфоцитов ставили реакцию спонтанного Е-розеткообразования с эритроцитами барана: к осадкам приливали по 0,1 мл среды 199 и 0,5%-ной суспензии эритроцитов барана. Далее смеси инкубировали при 36-37° в течение 10 мин, затем центрифугировали при 200 g 5 мин и инкубировали при 4°С в течение 1 ч. Затем проводили подсчет под микроскопом числа образовавшихся Е-РОК, т. е. лимфоцитов, окруженных тремя и более эритроцитами, на 100 клеток в каждой пробе.

Получены следующие результаты анализа: число Е-РОК в пробе без левамизола (Е) 55; число Е-РОК при концентрации левамизола 1 пг/мл 36 (E(,|); число Е-РОК при концентрации левамизола 10 мкг/мл 61 ().

Разности между количеством Е-РОК при каж.дой дозе левамизола и количество.м Е-РОК контрольной пробы составили

AEi Ел- ч- Е, , -19;

с.

ДЬ2 t/c ч (к) +0

ф ДЕ2-Л4ЕГ 25.

Характер разностей Е-РОК от малой к большой концентрация.м левамизола имеет положительное приращение (). Следовательно, делаем заключение о нарушении иммунологического статуса у данной больной.

пример 2. Больной П-в А. Г., 1923 года рождения, история болезни Л Ь 3463. Находился в гематологическом отделении клиники НИИМР АМН СССР с 10.12.79 по 21.12.79 г. Был вызван для контрольного обследования. Жалоб не предъявляет. В 1966 году был диагностирован лимфогранулематоз И А стадии с поражением шейно- надключичных и медиастинальных лимфоузлов. Прошел курс комбинированного лечения. С 1969 года наступила клиническая ремиссия. В настоящее время при обследовании признаков рецидива не обнаружено. Диагноз при выписке: лимфогранулематоз II А стадии в ремиссии продолжите.чьностью 10 лет.

14.12.1979 года у больного взята периферическая кровь. Все процедуры по выделению лимфоцитов и nocTaiiOBKe реакций проведены как описано выше.

Получены следующие результаты анали- за: число Е-РОК в пробле без левамизола (EJ 35; число Е-РОК при концентрации

левамизола 1 пг/мл (Е,- ) 45; число Е-РОК при концентрации левамизола 10 мкг/мл (Ecj) 23. Разности между количеством Е-РОК при каждой дозе левамизола и количеством Е-РОК контрольной пробы составили

ЛЕ: Е(с,)-Е(,, +10;

,4-EJ4 12; Ф ДЕг - AEfi .

Характер разностей Е-РОК от малой к боль- щой концентрациям левамизола имеет отрицательное приращение ().

Заключение: иммунологический статус в норме.

Таким образом иммунологический статус организма определяют не по абсолютной величине Е-РОК в суспензии лимфоцитов периферической крови, а по характеру приращения ф, исключив тем самым из рассмотрения фоновую составляющую Е|,-РОК. В случае если , делают заключение о нарушении иммунного статуса организма, если , судят о норме или восстановлении иммунного статуса.

Применение предлагаемого способа позволяет повысить эффективность контроля иммунологического статуса больных активной формой лимфогранулематоза, в сравнении с использованием одной концентрации левамизола, с 72% до 85%, а в случае ремиссии - до 80%.