Способ определения токсичности биологических жидкостей Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

4:: Oi СП

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для индикации токсимии при различных патологических состояниях.

Целью изобретения является снижение токсичности и ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

У беспородных белых крыс извлекают селезенку, гомогенизируют ее в физиологическом растворе и доводят концентрацию до 7500 ±800 ядросодержащих клеток в 1 мкл. При этом0,1 мл взвеси-селезеночных клеток добавляют к 0,2 мл 3%-ной уксусной кислоты (для лизиса эритроцитов, затрудняющих подсчет ядерных клеток) и подсчитывают число кариоцитов в 5 больщих квадратах камеры Горяева. Концентрацию доводят до 200 клеток в 5 больщих квадратах, т. е. 7500 в 1 мкл. Затем взвесь клеток разливают по 0,1 мл или 0,2 ил и добавляют к ней равный объем испытуемой жидкости, встряхивают и ставят в термостат. После 60-минутной инкубации при 37°С смесь вынимают из термостата, встряхивают и подсчитывают количество оставшихся клеток.

В качестве контроля используют забуференный физиологический раствор. Результат выражают в процентах по отношению к контролю. Расчет ведут по количеству клеток в 5 больщих квадратах камеры Горяева. Так, первоначальная концентрация 7500±300 клеткам в 5 больщих квадратах камеры Горяева. После добавления к взвеси клеток селезенки равного объема испытуемой жидкости концентрация ста0 новится равной 100±10 клеток в 5 больщих квадратах. После инкубации повторно подсчитывают количество клеток в 5 больщих квадратах камеры Горяева в опыте и контроле. Результат выражают в про центах по отнощению к контролю, который и является показателем токсичности. Расчет ведут по формуле

Х 100%--0 1001«

где О - количество клеток в опыте; К - количество клеток вконтроле;

X - токсичность, выраженная в процентах.

За 100% принимают количество клеток в контроле, следовательно, процент токсичности в контроле принимают за 0.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ путем инкубации пробы с тестовыми клетками организма, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности и ускорения способа, тестовые клетки и исследуеяую жидкость берут в соотношении 1:1, а и,нкубацию проводят в течение 60± ±15 мин, при этом в качестве тестовых клеток используют взвесь клеток селезенки крысы в концентрации 7500±800 клеток в 1 мкл и по наличию в пробе нелизированных клеток селезенки определяют токсичность биологической жидкости.