СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕЙ КОМПЛЕМЕНТАРНОЙ АКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ ПРИ ПЕРИТОНИТЕ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для определения общей активности комплемента при перитоните.

Известен способ определения общей комплементарной активности сыворотки крови по 50% гемолизу, который заключается в инкубации 300- и 120-кратного разведения исследуемой сыворотки со стандартной суспензией сенсибилизированных бараньих эритроцитов и последующим определением оптической плотности надосадочной жидкости на ФЭК. Активность комплемента выражают в гемолитических единицах. За одну 50% гемолитическую единицу комплемента принимают такое его количество, которое вызывает гемолиз 50% 0,5 мл стандартной суспензии сенсибилизированных эритроцитов при 37^oС за 45 минут (Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике/ Под ред. проф. В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987, с. 284-286).

Недостатком известного способа является его низкая точность, которая связана с трудностями стабилизации тестируемой культуры клеток, зависящей от резистентности эритроцитов барана, их концентрации, количества антител, используемых для сенсибилизации, величины рН.

Задача изобретения - разработка способа, позволяющего с более высокой точностью определять активность комплемента сыворотки крови. Поставленная задача достигается тем, что в известном способе, включающем инкубацию сыворотки крови с тестовой культурой клеток, существенным отличительным признаком является то, что с целью повышения точности способа, исследуемую сыворотку сравнивают с контрольной пробой, в качестве которой используют ту же сыворотку, предварительно инактивированную при 56^oС, а в качестве тестовой культуры - стандартную взвесь клеток селезенки крысы.

Способ осуществляют следующим образом. У беспородных белых крыс извлекают селезенку, гомогенизируют ее в забуференном физиологическом растворе, фильтруют через капроновый фильтр, подсчитывают количество ядросодержащих клеток с помощью камеры Горяева и готовят стандартную взвесь, содержащую 7500 клеток в 1 мкл. Затем взвесь клеток разливают по 0,1 мл в 2 пробирки. В первую пробирку вносят 0,1 мл свежей испытуемой сыворотки (опыт). Во вторую пробирку в качестве контроля добавляют 0,1 мл той же сыворотки, но предварительно инактивированной при 56^oС 30 минут. Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют 60 мин при 37^oС. После инкубации пробирки встряхивают и подсчитывают количество ядросодержащих клеток. Общую активность комплемента (OAK) выражают в процентах, пропорциональных количеству погибших клеток по формуле

Пример 1. У белых крыс извлекали селезенку, путем гомогенизации в забуференном физиологическом растворе получали клеточную взвесь, фильтровали через капроновый фильтр и с помощью камеры Горяева доводили ее концентрацию до 7500 ядросодержащих клеток в 1 мкл. Затем взвесь клеток разливали по 0,1 мл в две пробирки и в первую пробирку добавляли равный объем свежей сыворотки крови больного разлитым перитонитом (опыт), во вторую - добавляли 0,1 мл этой же сыворотки, но предварительно инактивированной при 56^oС 30 мин. После 60-минутной экспозиции при 37^oС пробирки со смесью вынимали из термостата, встряхивали и подсчитывали количество ядросодержащих клеток в каждой пробирке. Количество клеток в опыте - 2050 в 1 мкл, количество клеток в контроле - 5000 в 1 мкл, общая активность комплемента по формуле
ОАК=100-2050/5000•100 составила 59%.

Пример 2. У белых крыс извлекали селезенку, путем гомогенизации в забуференном физиологическом растворе получали клеточную взвесь, фильтровали через капроновый фильтр и с помощью камеры Горяева доводили ее концентрацию до 7500 ядросодержащих клеток в 1 мкл. Затем взвесь клеток разливали по 0,1 мл в две пробирки и в первую пробирку добавляли равный объем свежей сыворотки крови здорового донора (опыт), во вторую - добавляли 0,1 мл этой же сыворотки, но предварительно инактивированной при 56^oС 30 мин. После 60-минутной экспозиции при 37^oС пробирки со смесью вынимали из термостата, встряхивали и подсчитывали количество ядросодержащих клеток в каждой пробирке. Количество клеток в опыте - 6488 в 1 мкл, количество клеток в контроле - 7300 в 1 мкл, общая активность комплемента по формуле
ОАК=100-6488/7300•100 составила 11,1%.

С использованием прототипа и предложенного нами способа обследовано 83 больных острым перитонитом и 30 здоровых доноров (контрольная группа).

Показатели общей активности комплемента в сыворотках здоровых доноров и больных перитонитом при определении известным способом практически не разнились. Они составляли 30,2±7,4 ед. СН50 в контрольной группе, 35,0±8,6 ед. СН50 у больных перитонитом. При определении активности комплемента предлагаемым способом показатели в группе больных перитонитом более чем в 4 раза были выше, чем у здоровых лиц (59,5±1,1% против 10,6±0,2%).

Таким образом, результаты показали, что предложенный способ по сравнению с прототипом позволяет с более высокой точностью определять общую активность комплемента сыворотки крови и своевременно проводить обоснованную корригирующую терапию, что будет способствовать снижению летальности у больных перитонитом, снижению числа послеоперационных осложнений.

Изобретение относится к медицине. Способ осуществляют путем инкубации испытуемой сыворотки со стандартной взвесью клеток селезенки крысы. При этом в качестве контроля используют эту же сыворотку, но предварительно инактивированную при 56^oС, и по наличию в пробе лизированных клеток селезенки определяют общую активность комплемента в процентах. Способ позволяет более точно определять общую активность комплемента сыворотки крови.

Способ определения общей комплементарной активности сыворотки крови при перитоните путем инкубации сыворотки с тестовой культурой клеток, отличающийся тем, что исследуемую сыворотку сравнивают с контрольной пробой, в качестве которой используют ту же сыворотку, предварительно инактивированную при 56^oС, а в качестве тестовой культуры - стандартную взвесь клеток селезенки крысы.