Способ определения эндотоксемии при ожоговой болезни Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения токсичных свойств сыворотки крови при различных заболеваниях.

Целью изобретения является повышение точности способа,

Способ осуществляют следующим образом.

Из испытуемой пробы крови выделяют лейкоциты и сыворотку. Полученную сыворотку (0,1 мл) разводят в 4 раза физиологическим раствором (0,3 мл) и фильтруют через владипоровый фильтр УАМ-100. При этом из сыворотки отфильтровываются белки с молекулярной массой выше 10 кД. В осадке остаются среднемолекулярные пептиды, обуславливающие токсические свойства сыворотки.

Лейкоциты выделяют из ге- паринизированной крови общепринятым методом - кровь отстаивают в термостате при 37°С под углом 45° в течение 30 мин. Отсасывают надосадочную плазму, обогащенную лейкоцитами, Лейкоциты осаждают

путем центрифугирования при 1000 об/мин и дважды отмывают физиологическим раствором.

К осадку отмытых лейкоцитов добавляют физиологический раствор в таком количестве, чтобы довести концентрацию лейкоцитов примерно до 2x106 клеток (в среднем 0,4 мл физиологического раствора). Точную исходную концентрацию лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева, предварительно добавив к 0,1 мл взвеси лейкоцитов 0.2 мл физиологического раствора и 1,6 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты (исходная проба).

К 0.1 мл лейкоцитарной взвеси добавляют 0,2 мл физиологического раствора и помещают в термостат при 37°С на 90 мин (контрольная проба). К 0,1 мл лейкоцитарной взвеси добавляют 0.2 мл ультрафильтрата аутологичной сыворотки и помещают в термостат при 37°С на 90 мин (опытная прсба). После инкубации в каждую пробу добавляют 1,6 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты и подсчитывают количество лейкоцитов в каждой пробе.

СО

с

о ю

S

VI

Степень токсичности испытуемой сыворотки оценивают по показате

лю токсичности сыворотки (ПТС).

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения эндотоксемии при ожоговой болезни. Цель изобретения - повышение точности. У больного с ожогами производят забор крови, выделяют сыворотку и лейкоциты и вычисляют индекс токсичности. При его значении больше 10% определяют эндо- токсемию. По сравнению с прототипом на 30% снижается количество ложноположи- тельных результатов и на 12% - ложноот- рицательных.

птг - количество лейкоцитов в контрольной пробе -количество лейкоцитов в опыте х .-.,.

исходное количество лейкоцитов

Пример Кровь интактной крысы собирают в 2 пробирки - пробирка с гепарином (50 ЕД на 1 мл крови) для получения лейкоцитарной взвеси и пробирка для консерванта для получения сыворотки.

После свертывания крови в пробирке без консерванта сгусток отделяют от стенок пробирки и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Полученную сыворотку фильтруют через владипоровый фильтр УАМ - 100 с помощью мембранной установки под давлением 2 атм. В опыте используют ультрафильтрат аутологичной сыворотки.

Лейкоциты выделяют из гепаринизи- рованной крови общепринятым методом - кровь отстаивают в термостате при 37°С под углом 45° в течение 30 мин. Отсасывают надосадочную плазму, обогащенную лейкоцитами, Лейкоциты осаждают путем центрифугирования при 1000 об/мин и дважды отмывают физиологическим раствором по 1 - 2 мин.

К осадку отмытых лейкоцитов добавляют физиологический раствор в таком количестве, чтобы довести концентрацию лейкоцитов примерно до 2x106 клеток (в среднем 0,4 мл физиологического раствора). Точную исходную концентрацию лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева, предварительно добавив к 0,1 мл взвеси лейкоцитов 0,2 мл физиологического раствора и 1,6 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты (исходная проба). К контрольной пробе, состоящей из 0,1 мл лейкоцитарной взвеси, добавляют 0,2 мл физиологического раствора и помещают з термостат при 37°С на 90 мин. К опытной пробе, состоящей из 0,1 мл лейкоцитарной взвеси, добавляют 0,2 мл ультрафильтрата аутологичной сыворотки и помещают в термостат при 37°С на 90 мин. После инкубации в каждую пробу добавляют 1,6 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты и подсчитывают количество лейкоцитов в каждой пробе.

Получены следующие результаты:

Количество лейкоцитов

в исходной пробе23

Количество лейкоцитов

а контрольной пробе21

Количество лейкоцитов

в опытной пробе 21 -19

ПТС 23

X

П р и м е р 3. Ожог крысе наносят контактным способом (площадь ожога 25% по- верхности тела, III Б степени). Через 3 дня после ожога кровь собирают в 2 пробирки и проводят анализ по методике, описанной в примере 1.

Получены следующие показатели: Количество лейкоцитов

в исходной пробе71

Количество лейкоцитов в контрольной пробе66

Количество лейкоцитов в опытной пробе 48

ПТС

66 -48

71

Х100 % 25%

Способ определения токсичности сыворотки крови позволяет проще и точнее оценить не изученное ранее действие токсинов на лейкоциты; дает возможность определить токсичность сыворотки крови за 2,5 3 ч; может быть использован не только для определения уровня токсемии при ожоговой болезни, но и для оценки эффективности проводимого лечения. Кроме того, предлагаемый способ может применяться

для определения токсичности крови и при других заболеваниях (поражениях печени, почек, острых отравлениях и пр.).

По сравнению с прототипом снижается количество ложноотрицательных результатов на 30%, а ложноположительных на 12 %. Формула изобретения Способ определения эндотоксемии при ожоговой болезни, включающий забор крови больного, выделение сыворотки, инкубацию с форменными элементами крови с последующим вычислением показателя токсичности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, из крови дополнительно выделяют лейкоциты и

инкубируют их с сывороткой, при этом сыворотку предварительно подвергают ультрафильтрации, и при индексе токсичности более 10% определяют эндотоксемию.