Способ постановки реакции микроагглютинации Советский патент 1985 года по МПК A61B10/00 

оо ел

со

Изобретение относится к медицине, а именно к прикладной иммунологии и может быть использовано в экспериментальной иммунологии и микробиологии для количественного определения антител в сыворотках.

Цель изобретения - определение титра антител в сыворотке к растворимому антигену и повышение чувствительности реакции.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу постановки реакции микроагглютинации, предварительно к каждому разведению исследуемой сыворотки добавляют в соотношении 1:10 (по объему) 1%-ную стабилизированную суспензию стафилококканосителя протеина А, и затем взвесь концентрируют.

Изобретение осуществляется следующим образом.

В центрифужных пробирках готовят разведения (1:100,, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600 и т.д.) исследуемой кроличьей противодифтерийной сыворотки на физиологическом растворе хлористого натрия, каждое в объеме 5 мл. В каждую пробирку вносят по 0,5 мл 1% -ной стабилизированной суспензии стафилококка-носителя белка А (штамм Кован 1), инкубируют при 20° в течение 1 ч при периодическом встряхивании.

Для концентрирования иммобилизованны) антител содержимое пробирок центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин.

декантат отбрасывают, осадок ресуспеидируют забуференным физиологическим раствором рН 7,2 с 0,1% бычьего сывороточного альбумина в 1/10 первоначального объема разведения сыворотки, т.е. в 0,5 мл.

Реакцию микроагглютинации проводят на стекле при 20°. Для этого на стекло помещают капли растворимого антигена - коммерческого препарата дифтерийного анатоксина (каждая в объеме 0,02 мл), добавляют по капле 0,02 мл суспензии стафилококка с иммобилизованными на нем антителами (из каждого разведения сыворотки).

Контроли I и II для исключения спонтанной агглютинации: к капле стабилизированной 1%-ной суспензии стафилококка добавляют каплю забуференного физиологического раствора; к капле 1%-ной суспензии стафилоккока с иммобилизованными антителами (из разведения сыворотки 1:100) добавляют каплю забуференного физиологического раствора.

Контроль III для исключения неспецифической реакции: к капле 1%-ной суспензии стафилококка с иммобилизованными антителами из разведения сыворотки 1:100 добавляют каплю коммерческого препарата столбнячного анатоксина.

Результаты учитывают визуально или с помощью лупы по появлению агглютината при отрицательной реакции в контроле в течение 3-5 мин.

СПОСОБ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ МИКРОАГГЛЮТИНАЦИИ путем соединения на стекле в каплях различных разведений иммунной сыворотки и антигена, отличающийся тем, что, с целью определения титра антител в сыворотке к растворимому антигену и повышения чувствительности реакции, предварительно к каждому разведению исследуемой сыворотки добавляют в соотношении 1:10 (по объему) 17в-ную стабилизированную суспензию стафилококканосителя протеина А, и затем взвесь концентрируют.