Способ определения влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

1 Изобретение относится к исследов нию и анализу биологических веществ а именно определению остаточной влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах, и может быть использовано в медицине и сельском хозяйстве. Известен способ определения оста точной влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах l . Сущность этого способа заключает ся в том, 4to предлагается электрон ное устройство для определения инте сивности испарения влаги при сушке биологических материалов. Недостатком этого способа является то, что он не позволяет измерять остаточную влажность сухих и лиофилизированньк биологических продуктов при длительном их хранении и непосредственно перед использованием. Известен способ определения оста точной влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах 2 . . Сущность известного способа заключается в том, что для определения остаточной влажности биологических продуктов к ним добавляют люминесцентные красители и после облучения пробы светом измеряют интенсивность фосфоресценции красителя в фосфороскопе. Однако данньй способ имеет невы сокую точность определения остато ной влажности и, кроме того, связа с облучением образца светом, что может привести к повреждению интак ности некоторых светочувствительны биологических препаратов. 1звестен способ определения ост точной влажности в сухих и лиофили зированных биологических продуктах Сущность известного способа сос ,тоит в том, что остаточная влажнос образца определяется с помощью спе циального реактива титрованием. Однако известный способ не достаточно точен, требует длительного времени, трудоемок и не применим в массовом промьшшенном производстве Кроме того, после анализа образец становится не пригодным для дальне шего использования. 82 Цель изобретения - повышение- точности, сохранение нативности препарата. Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах путем введения активной добавки в пробу с последующей регистрацией физикохимического параметра, в качестве добавки используют спиновую метку и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса, и по изменению формы спектра по сравнению с контролем определяют остаточную влажность в пробе. Способ осуществляется следующим образом. В пробу вводят иминоксильный радикал и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). На фиг. 1 приведен спектр спиновых меток на высушенных образцах вакцины против ньюкаслской болезни кур при ЗСРс, обобщенный вид, а также приведены параметры спектра ЭПР, используемые при построении калибровочного графика зависимости параметра h,/A| от относительной влажности образца, который приведен на фиг, 2. Для определения остаточной влажности испытываемого образца необходимо снять спектр этого образца на ЭПР-спектрометре, измерить по этому спектру отношение параметров h,/A, и на калибровочном графике (фиг, 2) измерить значение относительной влажности данного образца. Контрольные измерения, проведенные для экспериментальной проверки результатов, полученных при измерении остаточной влажности согласно предлагаемому способу, показали следующее. Точность измерения повышается вследствие того, что измерения по известному способу требуют приготовления многокомпонентного реактива Фишера, составные части которого тщательно очищаются, взвешиваются и не должны контактировать с водой, в то время как предлагаемый способ заключается в одном измерении параметра спектра ЭПР спиновой метки на спектрометре. Процесс изме.рения остаточной влажности по известному способу приводится в специальных боксах титрованием определенной навески препарата, что вносит допол нительные ошибки при взвешивании и титровании и снижает точность получаемых результатов. Для приготовления реактива Фишера, используемого в известном способе, требуются 1 сут. Реактив Фишера неустойчив при хранении (7 сут) и требует постоянного обновления. Непосредственно для проведения определения остаточной влажности препарата титрованием навески готовым реактивом Фишеранеобходимо около 30 мин. Для регистрации спектра ЭПР одно го образца согласно предлагаемому способу требуется 1 мин. Измерения параметра h(/A| можно проводить с очень большой точностью с помощью прибора (сп ктрометра), что, однако не увеличивает время регистрации. Введение спиновых меток в испытываемые образцы согласно предлагаемо му способу не повреждает нативность препаратов, которые в дальнейшем могут использоваться по назначению поскольку спиновые метки обладают низкой токсичностью. Пример. Готовят экспериментальные серии эмбриональной вак1щны против ньюкаслской болезни кур в чистом виде. К каждому образцу серии добавляют раствор спиновой метки (можно использовать спиновые метки любой химической природы) из расчета, чтобы конеч ная концентрадия спиновой метки в растворе составляла 10 моль/л . В данном примере была использована .спиновая метка следующей струк туры: У- СНа- CO-NH I Смесь вакцины и спиновой метки вьщерживают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем подвергают лиофильному высушиванию обычным способом на промьшшенной ycTaHQBKe. По ходу высушивания извлекают из установки контрольные образцы и оп- ределяют в них остаточную влажность по методу з1 с помощью специального реактива (реактив Фишера). Па раллельно в этих же образцах измеряют параметр ,спектра ЭПР спиновой метки (фиг. 1). По результатам этих измерений строят калибровочный график зависимости параметра спектра ЭПР спиновой метки от остаточной влажности для данного препарата вакцины (фиг. 2). Этот калибровочный график для данной спиновой метки и данного вида лиофилизированного препарата может служить в дальнейшем для определения остаточной влажности влк)бом количестве образцов,содержание воды в которых неизвестно. Предлагаемый способ позволяет осуществлять контроль остаточной влажности препаратов во время проведения процесса высушивания, поскольку время проведения анализа очень мало. Предлагаемый способ позволяет определить остаточную влажность в сухих и лиофилизированных биологических продуктах самой разичной природы с очень высокой точостью, с небольшими затратами вреени и реактивов, не повреждая инактности испытываемого продукта.

12

20 28 °/оН20

(puz.Z

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЛАЖНОСТИ В СУХИХ И ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОДУКТАХ путем введения активной добавки в пробу с по- следукнцей регистрацией физико-химического паргшетра, отличающийся тем, что, -с целью повышения точности и сохранения нативности препарата, в качестве добавки используют спиновую метку и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса, и по изменению формы спектра по сравнению с контролем определяют остаточную влажность в пробе. (Л с: ел о ел 00 00