Способ газохроматографического анализа жирных кислот Советский патент 1985 года по МПК G01N30/02 

I11 Изобретение относится к аналити-. ческой химии, в частности к способам газохроматографического анализа карбоновых кислот, и может использоваться в химических и биохимических лабораториях в качестве метода контроля за содержанием карбоновых кислот в анализируемых образцах. Целью изобретения является повышение селективности способа и расширение области его применения за счет улучшения условий анализа и газохроматографических характеристик образукщихся зфиров. На фиг, 1 показано разделение гек сафторизопропиловых. ( ot ) и метиловых (6 ) эфиров жирных кислот (где C,. - эфиры пористолеиновой кислоты, Cjj.Q- эфиры пентадекановой кислoтыj С.,.р- эфиры пальмитиновой кислоты, C.f- эфиры пальмитолеиновой -эфиры маргариновой кислоты, -эфиры стеариновой кис кислоты. лоты эфиры олеиновой кислоты Ctg.,2 эфиры линолевой кислоты, C|g.7эфиры линоленовой кислоты ;C2o,j - эфир ц-11-зйкозеновой кислоты; С. эфир 11,14-эйкозодиеновой кислоты; С.эфиры арахидоновой кислоты; э ры эруциновой кислоты, общая ко-нцент рация 1 мг/мл);на фиг. 2 - разделени гексафторизопропилового эфира тридексановой кислоты (.д)и метиловог эфира церотиновой кислоты (МЕС.р), на фиг. 3 - разделение и индексы уде живания гексафторизопропил вого (F, С,.) и метилового (,р) эфира пальмитиновой кислоты на фоне пре дельных углеводородов С на фиг. 4 - нижний предел чувствительности ЭЗД к гексеифторизопропиловому эфиру пальмитиновой кислоты(сигнал:шум 10:1), соотношение чувствительности пламенноионизационного и электроннозахватного детектора к разным количест вам гексифторизопропилового эфира пальмитиновой кислоты;на фиг. 5 - калибровочные характеристики электронно-захватного и пламенно-ионизащюнного детекторов. Пример 1.К смеси жирных ки 8:0 .1 16:г (8: гoI t взятых в количестве 10 г So: 4 гм добавляют 50 мкл смеси бензол-гекса фторизопропанол (4:1) и 50 мкл раствора (5% по объему) трифторуксусног ангидрида в бензоле. Реакционную 6 смесь закрывают и вьщерживают при 40 С в течение 30 мин. Затем реакционную смесь упаривают в токе азота и полученный остаток растворяют в 100 мкл гептана. В хроматограф вводят 1 мкл раствора. Анализ проводится на капиллярной колонке с фазой Силар10С. Внутренний диаметр - 0,25 мм, длина 50 м. Температурный режим анализа: начальная - 140 С/5 мин, конечная 230°С, скорость подъема температуры 2°С /мин, инжектор - 240°С, пламенно-ионизатдионный детектор 350 С. Газовый режим анализа: газ- носитель-водород, линейная скорость- 40 см/с, входное деление 1:30, при одновременном детектировании на пламенно-ионизационном детекторе и электронно-захватном на выходе капиллярной колонки устанавливается делитель потока, осуществляющий деление потока на каждый детектор в соотношении 1:1, добавочный газ, подаваемьй в выходной делитель-азот, расход 50 мл/мин, промывочный поток азота в электроннозахватном детекторе 12 мл/мин, поток водорода в пламенно-ионизационный детектор - 25 мл/мин. Полученная хроматограмма представлена на фиг, 1 (а). На фиг. 1 (б) представлена хроматограмма тех же кислот в виде метиловых эфиров. Как видно из этих хроматограмм, при одинаковом времени, анализ фторированных эфиров проходит при значительно более низкой температуре с большей чувствительностью и лучшим разрешением. Сопоставление результатов анализа по известному и предлагаемому способам представлены в табл. 1.. Пример 2. Смесь метилового эфира церотиповой кислоты (С, ) и гексафторизопропилового эфира триде- кановой кислоты (), полученного в условиях, аналогичных примеру 1. Разделение проводят в условиях примера 1, детектируя разделенные компоненты пламенно-ионизационным детектором и программируя температуру колонки до 240с, Хроматограмма разделения смеси представлена на фиг.2, из которой следует, что способ позволяет анализировать жирные кислоты с длиной в 30 углеродных атомов на полярных: фазах. Пример 3. Смесь метилового и гексафторизопропилового эфиров 3 пальметиновой кислоты (С,. ) , растворенных в предельных углеводородах С.,, - при общей концентрации в 4 / растворе 1 мг/мл проводят .в услови примера 1, осуществляя разделение изотермическом режиме при 140 и детектированием разделенных компонентов одновременно на двух детекторах, Хроматограмма разделения представлена на фиг. 3. Результаты представленные на фиг. 3 и данные табл. 2, полученные при хроматогра фировании смеси кислот C 2г условиях примера 1, показывают, чт жирные кислоты в виде 1,1,1,3,3,3гексафторизопропиловых эфиров имею индексы удерживания на 4 единицы меньше, соответствующих им метилов эфиров, что позволяет проводить ан лиз при температурах на 40°С ниже чем в случае известного способа. Индексы удерживания зфиров кислот представлены в табл. 2, Пример 4, В условиях примера 1, но при 170 С и одновремен46„ 4 ной регистрации разделенных компонентов пламенно-ионизационным и электронно-захватным детекторами анализируют различные количества пальметиновой кислоты в 1,1,1,3,3, 3-гексафторизопропиловых зфиров. Хроматограммы представлены на фиг. 4, а на фиг. 5 и табл. 3 - ка- дибровочные характеристики. Результаты калибровки пламенно-ионизационного и электронно-захватного детекторов представлены в табл. 3. Из представленных данных следует, что линейность электронно-захватного детектора сохраняется и не отличается от пламенно-ионизационного детектора в исследуемых количественных пределах,. Пример 5. В условиях примера 1 проводят оп{)еделение жирных кислот в вроде 1,1,1,3,3,3-гексафторизопропиловых эфиров из 10 мкл цельной крови. Результаты анализа крови на содержание жирных кислот представлены в табл. 4. Т а б л и ца 1

СПОСОБ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ЖИРНЫХ КИСЛОТ путем проведения этерификации анализируемой смеси с последующим разделением полученных эфиров на хроматографической колонке с циансиликоновой неподвижной жидкой фазой, отличающийся тем, что, с целью .повьшения селективности способа и расширения области его применения, этерификацию проводят обработкой анализируемой смеси гексафторизопропанолом. (Л 9д 00 эо :У:

0,5

SM (5;о

1&1СЛОТЫ в виде соответствующих эфиров

«4;

С,5: о 16io (бМ

Превосходит HSBectHb

1,3 в 2,5 раза

Таблица 2

Линейные индексы удерживания (J) Известный способ I Предлагаемьй способ

22,618,1

18,7 19,7 20,0

Площадь пика, мкВс.

Продолжение табл.2

Таблица 4 ПИД X J20

53Д1000

О с с5

тдВо

ю

°R 5

О

&

Площадь

пика мкв-сек

тот

20000

2000

200

1-10 //&

1-10 f-10 Ко/шчкпЛо образца

Фиг. У