Способ разделения популяций клеток Советский патент 1985 года по МПК A61B10/00 

О)

со

О)

1

Изобретение относится к биофизике и может быть использовано для создания высокопроизводительньк и селективных приборов, сепарирующих клеточные популяции.

Цель изобретения - ускорение и повышение выхода клеток,

Способ осуществляют следующим образом.

Используют монослой Ь-клеток, предварительно инкубированный в среде с конканавалином А. Используют также магнитолипосомы с антителами против конканавалина А, Магнитолипосомы получают из дистероилфосфатидилхолина. В круглодонную колбу помещают раствор липида в хлороформметаноле (2:1) и добавляют ферромагнитные частицы (диаметром 50 нм) 15 мг липида в 3 мл растворителя смешивают с 2 мг частиц и содержимое колбы выпаривают при вращении на роторном испарителе. К образовавшейся пленке приливают 1 мл .буферного солевого раствора или раствора Хэнкса и колбу интенсивно встряхивают. Полученную эмульсию подвергают ультразвуковой обработке в течение 30 с при на приборе УЗЛН-2. В среду

696152

перед озвучиванием добавляют антитела против конканавалина А. От несвязавшихся антител липосомы отделяют 4 кратным центрифугированием 5 (2000 , 5 мин). Магнитолипосомы инкубируют с клетками в течение 20 мин. Полученные клетки смешивают с L-клетками, не имеющими на себе молекул конканавалина. Образовав0 шуюся смесь пропускают через устройство, представляющее собой трубку, внутри которой действует стационарное магнитное поле с периодически меняющимся вдоль этой трубки гради5 ентом напряженности. После этого измеряют концентрацию полученных конканавалином клеток до и после разделения. Выделенная фракция налипала на стенки трубки вблизи полюсов поля. Обогащение этой фракции клетками, имеющими на себе конканав-алин А, по сравнению с первоначальной смесью составляло 4,7 ±0,2. Эффективное время составляло 3-5 мин. За это время

5 разделяли порядка 1 млн клеток, так как эффективная скорость разделения составляла несколько сот тысяч клеток в мин, что более чем на порядок вьше, чём у известного способа.

СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ПОПУЛЯЦИИ КЛЕТОК, включающий присоединение к исследуемым клеткам маркирующих антител, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения выхода клеток, специфические антитела связьшают с липосомами, содержащими монокристаллы ферромагнитного материала, а разделение осуществляют в неоднородном магнитном поле, при этом создают дрейф градиента в направлении, в котором производят выделение данного типа клеток.