Способ определения минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков Советский патент 1985 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/18 

И-зобретение относится к микробиологии и предназначено для ускоренноIo определения ми1гимальной ингибирую щей концентрации (МЛК) антибиотика в отношении исследуемых культур микроорганизмов. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Способ осуществляется следующим образом. Из бумаги, покрытой полимерной пленкой, вырезают диск диаметром 10 си и на его гидрофобной поверхности наносят 22 квадратных зоны пло щадью 1,5x1,5 см, как указано на чертеже. В фарфоровую ступку берут навеску сдедующих порошков, г: глюкоза 1,5; сахароза 0,15; фенолрот 0,02; поливиниловый спирт 1, растирают до получения мелкодисперсной пудры красного цвета, которую растворяют в 98 мл фосфатного буферного раствора рН 8,0 на водяной бане при подогревании до 100 С. Отобранные антибиотики в стандар ных флаконах разводят стерильной дис тиллированной водой с таким расчетом чтобы после добавления 0,1 мл раство ра антибиотика в 0,9 мл приготовленного ранее субстратно-индикаторноклеющего раствЪра со стабилизатором в 1 мл полученной смеси содержалось соответственно 200, 100, 50, 25 и 12,5 ЕД. В центр каждой зоны микропипеткой наносят по 0,02 мл смеси с антибиотиком согласно обозначениям на диске, за исключением контрольных зон КК и КФ, где размещают только субстратно-индикаторно-клеющий раствор со стабилизатором (0,02 мл). Подсушивают при 20 С до полного высыхания микрокапель, затем готовые тест-системы складывают в картонную коробку и хранят в холодильнике при А-8°С. В крышку чашки Петри укладывают готовую тест-систему и на каждую бляшку наносят по одной капле испытуемой микробной культуры. Применяют 18-часовую агаровую микробную культуру концентрацией 210 м.т. в 1 мл. В контрольную зону КФ наносят каплю стерильного физиологического раствора. Чашку с пробами закрывают, предварительно размещая внутри по окружности смоченную водопроводной водой полоску фильтровальной бумаги, инкубируют в термостате при 37 С 5 ч. Учет результатов проводят визуально. Изменение цвета капли из красного в желтый указывает на устойчивость испытуемой микробной культуры к соответствующим концентрациям данного антибиотика, а сохранение первоначального красного цвета - на ингибицию ферментативной активности и размножения микробной культуры соответствующей дозой антибиотика. Минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика в отношении исследуемой микробной культуры определяют по величине ингибирующей дозы. Например, в каплях с концентрациер пенициллина от 0,25 до 1 ЕД окраска стала желтой, а с 2 ЕД и выше-красной, следовательно МИК пенициллина равняется 2 ЕД,

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ШНКМАЛЬНОЙ ИНГИБИРУЩЕЙ КОНЦЕНТРАЦИИ АНТИБИОТИКОВ, включающий их кратное разведение, стабилизацию, высушивание, добавление культуры микроорганизмов и термостатирование, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, раствор антибиотика стабилизируют смесью, содержащей глюкозу, фенолрот, сахарозу, поливиниловый спирт, буферный раствор, при следующем соотношении компонентов, мас.%: Антиби.отик 0,00000025-0,000016 1,4-1,6 Глюкоза 0,015-0,025 Фенолрот О,14-0,16 Сахароза Поливиниловый 0,9-1,1 спирт Буферный Остальное раствор затем полученную смесь наносят на Ь гидрофобную поверхность бумажного диска, высушивают на воздухе, далее добавляют каплями суспензию микроорганизмов и по изменению цвета инди-каторной бляшки определяют минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика. СП tc ел