Предложенное изобретение относится к микробиологии и предназначено для быстрого и экономичного определения ферментативных свойств микроорганизмов Известны способы определения ферментативных свойств микробов, в частностн, их способности усваивать те или иные углеводы, предусматривающие использование питательных сред с испытуемыми углеводными субстратами и кислотно-основной индикатор . Общим недостатком конкретных методических приемов используемых при реализации указанных способов, является их недостаточная экономичность,, так как они относительно сложны и применяются Ci использованием питательных cpeii, а такж характеризуются сравнительно низкой ско ростью определения ферментативных свойств микробов (через 18-24 час). Наиболее близким по своей технической сущности к предложенному ясвляе я способ идентификации микроорганизмов. который предусматривает использование бумажного диска диаметром чашки Петри из пропитьгоающей бумаги, который разделен на 6-8 зон. В каждую зону каплю субстрата-и индикатора, а затем быстро высушивают 2J. Бумажный диск с зонами, пропитанными различными субстратами и индикатором, кладут на поверхность агаровой пластинки, засеянной микробной культурой в чашке Петри и инкубируют 24 час при 37 С. Способ идентификации микроорганизмов основан на том , что субстрат и индикатор из импрегнированных зон .диффундируют в питательной среде с засеянной микробной культурой. Учет результатов ферментации субстратов производят по изменению цвета индикатора в этих зонах. Однако описьгоаемый способ недостаточно экономичен и не позволяет быстро определить ферментативные свойства микробов непосредственно в популяции микробных клеток без использования питательНЫХ сред и стерильных материалов, причем спектр определяемых биохимических при знаков ограничен 6-8. Цэлью изобретения является повышение 8КОНОМИЧНОСТИ и быстроты определения. Поставленная цель достигается тем, что ка поверхность бумажного диска на носят гидрофобное покрытие, а субстраты и индикатор размешают в виде точек в количестве 20-36 с последукяцей их фиксацией водорастворимым .клеем, предпочтительно поливиниловым спиртом. При этом для придания бумажному чиску гидрофобных свойств применяют силиконовую жидкость или испапьзуют бумагу с полимерной пленкой. Ги;фофобное покрытие позволяет использовать микроколичества субстрата и индикатора фиксированными в виде точки клеквдим полимером на поверхности диска Тем самым 5 еличивается количество испытуемых субстратов, снижается расход ингредиентов, поскольку исключается воз t5UO можность пропитьтания и. диффузии субстрата и индикатора в бумагу и увеличиваетсяскорость разложения микроколичеств субстрата микробными культурами, взятыми в высокой концентрации. На чертеже изображен бумажный диск I с гидрофобным покрытием, разделенный на квадратные зоны 2, в которых фиксирован субстратно индикаторно-клеющий раствор 3, где Ар-.арабинозй; Га- галактоза; Гл-глюкоза; Дк декстроза; Кс-ксилоза; Мн-манноза; Рм-рамноза; Рб-ри- боза; Фр-фруктоза; Лк-лактоза,: Мл-мальтоза;. Сх-сахароза; Рф рафиноза; Кр-крах мал; Гт-глицерит; Дт-дyльцит Ит-инозит Кт ксилит; Мт-маннит} Ст-сорбит , , Для определения ферментативных свойств микробов . готовят бумажный диск с ги :чpoфoбным покрытием 1, диаметром чашки Петри, приготовленный из листа бумаги, например, ватман, ко торый силик нируют, например, жидкостью ГКЖ-94, или из бумаги, покрь1той полимерной пленкой (материал, комбинированный для упаковки молока и молочных продуктов в пакеты тетраэдальной формы. ОСТ 49112-76). На гидрофобной поверхности диска 1 наносят 20-36 квадратных зон 2 площадью 1,5x1,5 или 1,Ох1,О см. К центру каждой зоны фиксированы в виде точек субстрат и индикатор, которые приклеены водорастворимым клеем. П р и м е р . Из листа бумаги ватман вырезают диск диаметром 9-1О см. расчерчивают 20-36 квадратных зон (площадью 1,5x1,5 см или 1,0x1,0 см) и обозначают сокращенно название субстрата. Затем волосяной кисточкой наносят слой силиконирующей жидкости КЖ-94 и подвергают диски термообраотке в сушильном шкафу при 90-10СГС течение 3-5 час. В фарфоровую ступку берут навеску орошков субстрата (например, моно-, И-, три-, полисахариды и многоатомные спирты) - 1 г, фенолрота - 0,О1 г, поливинилового спирта - 1 г и растворяют до получения мелкодисперсной пудры красного цвета, которую растворяют в 99 мл фосфатного буферного раствора рН 8,0 на водяной бане при 70-100°С и получают субстратно-индикаторно-клеющий рас твор. Затем в центр каждой зоны пипеткой с тонко оттянутым капилляром наносят по 0,01 мл. субстратно-индикаторно-клеющего раствора, подсушивают при 15-45 С до полного высыхания и приклеивания :микрокапбль... Готовый диск хранят при 15-25 С в полиэтиленовых мешочках, помещенных в картонные коробки, в течение 1года (срок наблюдения). По мере надобности их используют для определения ферментативных свойств микробов. С этой целью в крьтшку чащки Петри укладывают готовый диск. На каждый специфический субстрат наносят пипеткой по ОД110Й капле микробной взвеси концентрацией 5-10 млрд в 1 мл физраствора.. Чашку закрывают тем caмы прижимая по окружности диск и иякуби- РУЮТ при 37 С. Учет результатов производят через каждые ЗО мин до 5-7 час. При расщеплении субстрата микробной культурой окраска капли переходит из красного цвета в желтый. Формула изобретени 1. Способ определения способности микроорганизмов использовать различ- ные углеводные субстраты, предусматривающий размещение на бумажном диске субстратов и индикатора, о т л и ч а ю - щи и с я тем, что с целью повьииения точ- кости, упрощения и быстроты йпределения, на поверхность бумажного диска наносят гидрофобное покрытие, а различные субстраты и индикатор размещают в виде 2О-36 точек с последующим фиксирова-
5 7079635
нием их водорастворимым клеем - поли-Источники информации,
Бинилот,1М спиртом.принятые во внимание при экспертизе
2. Способ по п. 1, от л и ч а и - .i. Патент США № 3830703,
щ и и с я тем, что в качестве гидрофоб-кл. 195/103.5 К,:опубпик., 1974.
ного покрытия используют силиконирующую5 2. Патент США № 3856628,
жидкость или бумагу с полимерной плен-кл. 195/1О3.5 R, опубпик., 1974
-(прототип).
