Реагент для определения уреазной активности энтеробактерий Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/58 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть ис- пользовано для биологической дифференциации энтеробактерий.

Цель изобретения - повышение точности определения,

Пример 1. Из листа бумаги с пленочным-гидрофобным покрытием вырезают диск диаметром чашки Петри (9-10 см). На пленочной поверхности расчерчивают 20 квадратных зон пло- щадью 1,5 CMJ 1,5 см, В первую пробирку берут навески порошков мочевины (0,1 г) и глюкозы (0,2 r)i заливают забуференным физраствором с рН 5,5 (7,7 мп), затем помещают на водяную баню при 90°С для растворения мочевины и глюкозы. Во вторую йробирку : - вносят поливиниловый спирт (0,5 г) и заливают дистилированной водой (10,0 мл), затем растворяют над пламенем горелки или в водяной бане, В

(Третью пробирку вносят бромтимоловый синий водорастворимый (0,05 г), заливают дистилированной водой (10,0мп) и встряхивают до полного растворения. Затем в первую пробирку вносят по 0,1 МП растворов поливинилового спирта и бромтимолового синего, тщательно встряхивают, получая смесь для приготовления реагента. Дпя этого в центр каждой квадратной зоны носителя наносят по 1 капле объемом 0,02 мл смеси ингредиентов, оставляют при комнатной температуре до полного высыхания капель и получения реагентов в виде фиксированных микропленок диаметром 0,4- см.

Готовые реагенты хранят при комнатной температуре в течение трех лет (срок наблюдения),

Для определения уреазной активности микробов носитель с реагентами помещают в чашку Петри, а на ресл

1

1507797

агент наносят кагшю излучаемой микробной культуры, содержащей 3-5 мпрд и более микробных клеток }з 1 мл физрас- tBOpa забуференного с рН 5,5 - 0,1, jaiiiKy закрывают и инкубируют при |7 С. При наличии уреазоположительной г икробной культуры цвет капли- переводит из желтого до густо-синего, а 1|1ри наличии уреазоотрицательной мик- сбной культуры цвет капли остается 0ез изменений,

П р и м е р 2, Готовят реагент в Соответствии с примером 1, но компо- iieHTbi берут в следующих количествах; йас,%: мочевина 0,9; глюкоза 1,5; юливиниловый спирт 0,4; бромтимо- Ловый синий 0,04; забуференный физиологический раствор (рН 5,4) остальное ; Из 39-и исследованык культур одна Культура - слабоположительная реакция (ёеленый цвет), семь культур - положительная реакция, (синб-зеленый цвет), Si культура - резкоположительная реакция (густо-синий цвет),

П Р и м е р 3, Готовят реагент в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах; мас,%: мочевина 1,1; глюкоза 2,5; поливиниловый спирт 0,6; бромтимоловый синий 0,06, забуференный физраствор (рН 5,6) остальное.

Из 39-и исследуемых культур у всех 39 выявлена резкоположительная реакция (густо-синий цвет),

При исследовании 39-и уреазоположи- тельных культур энтеробактерий (16 ви- доы) с помощью известного реагента (СИБ с мочевиной) выявлено 25 культ- тур, с помощью реагента по изобретению - 39 культур.

Таким образом, использование нового реагента позволяет повысить точность определения уреазной активности микроорганизмов;

20 25

|5 Формула изобретения

Реагент для определения уреазной активности энтеробактерий, содержащий мочевину, индикатор рН, поливиниловый спирт и растворитель, отлич аю- щ и и с я тем, что, с целью повышения точности определения, он дополнительно содержит глюкозу, в качестве индй-г катора рН он содержит бромтимоловый синий водорастворимый, а в качестве растворителя - физиологический рас твор забуференный с рН 5,4-5,6 при следукидем количественном соотношении

компонентов, мас,%: Мочевина Глюкоз а

Поливиниловый спирт Бромтимоловый синий Указанный физиоло- гический раствор

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для биохимической дифференциации энтеробактерий. Цель изобретения - повышение точности определения. Реагент содержит мас.% мочевину 0,9-1,1

глюкозу 1,5-2,5

поливиниловый спирт 0,4-0,6

бромтимоловый синий водорастворимый 0,04-0,06

физиологический раствор забуференный рН 5,4-5,6. Реагент наносят на лист бумаги с пленочным гидрофобным покрытием и высушивают. Для проведения определения уреазной активности на сухой реагент наносят каплю исследуемой культуры и по характеру окрашивания определяют степень активности (изменение цвета из желтого в зеленый и далее густо-синий).