Способ определения клеточного иммунитета Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

4

СО 00 Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к цитологическим способам олределения реакции трансформации лейкоцитов в краткосрочной культуре in vitro, что характеризует состояние клеточного иммунитета организма, и может быть использовано в клинических медицинских и ветеринарных лабораториях. Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения клеточного иммунитета. Пример 1.У исследуемого донора берут из локтевой вены кровь в объеме 1-2 мкл в предварительно обработанную гепарином пробирку (8 - 10 ед/мл). С момента забора крови и ее доставки время не должно превышать 1 - 2 ч. Кровь отстаивают в течение 30 40 мин при комнатной температуре.. Затем взвесь лейкоцитов в плазме переносят в центрифужную пробирку и .. центрифугируют 10 NMH при 800 об/мин Плазму отсасывают при помощи пас- теровской пипетки и к лейкоцитам добавляют питательную среду, состоящую из среды 199 и 35-40%-ной аутологичной плазмы. Конечная концентрация лейкоцитарных клеток должна составлять 1,5 -10 - 2,0-10в 1 мкл суспензии. В случае, если содержание нелимфоидных элементов более 70%, их необходимо выделитъ отдельно и добавить в необходимой пропорции. Суспензию клеток наносят а виде капель на обезжиренное предметное стекло и помещают во влажную камеру. Инкубируют лейкоциты при в течение 1-2 ч. Стекла вынимают из камеры, осторожно споласкивают дистиллированной в дой, высушивают иа воздухе,фиксируют и окрашивают ро Паппе гейму ..Подсчитывают число бласттрансформированных ли фоцитов (по включению зц-римидина) транформированных клеток нелимфоидно природы. После инкубации число тран формированных лимфоцитов у здоровых людей 42%, трансформированных клеток нелимфоидной природы 21%. Пример 2. Больная К.,28 ле Диагноз: ревматизм,, активная форма, II-1II степени рецидивирующий ревмо кардит. Жалобы на боли в суставах и в области грудной клетки слева, пер дическое повьшение температуры. Бол с пяти лет. Объем движеНРЙ в коленн суставах ограничен, суставы болезненны, припухлость кожи над суставами, субфебрильная температура, комбинированный митральньй порок. При поступлении: количество эритроцитов 4-10 л, гемоглобин 110 г/л,, ц.п. 0,8, количество лейкоцитов 8,8.10 л, РОЭ 27 ,мм/ч, ревмопроба отрицательная. Количество лимфобластов 57%, трансформированных клеток нелимфоидной природы76%. Больная принимала лечение: капли Стражеско, бисептол, фуразолин, димедрол, адонизид, комплекс витаминов. В результате проведенного лечения состояние больной улучшилось и в удовлетворительном состоянии она была выписана. При вьшиске; количество эритроцитов 4,2. 10 л, гемоглобин 113 г/л, ц.п. 0,8, количество лейкоцитов 610 л, РОЭ 10 мм/ч, ревмопроба отрицательная, Лимфобласты 41%, трансформированные нелимфоидные клетки 35%, Анализ препаратов по предлагаемому . способу показал, что изменение количества трансформированных клеток лимфоидной и нелимфоидной природы коррелирует с изменением клинического состояния больной. П р и м .е р 3. Больная К., 23 года, поступила 02.12.82, вьшисалась 24.12.82 г. Диагноз: ревматизм, активная форма, 1 ст., рецидивирующий миокардит. Жалобы на боли в суставах и в области ГРУДНОЙ клетки слева, субфебрильную температуру, слабость. Заболевание началось 1,5 мес назад после острой.ангины. Хруст в суставах, болезненность при сгибании, объем движений в суставах ног ограничен. При поступлении: количество эритроцитов 4,4 -10 л, гемоглобин 133 г/л, ц.п. 0,9, количество лейкоцитов 8,3-10 л, РОЭ 8 мм/ч, ревмопроба отрицательная. Лимфобластов 68%, трансформированных нелимфоидных клеток 43%. В стационаре больная получила лечение:, аскорутин, пенициллин, анальгин, олеотетрин, делагил. В результате проведенного лечения состояние больной существенно улучшилось и она в удовлетворительном состоянии была выписана из стационара. При выписке: количество эритроцитов 4, л, гемоглобин 136 г/л. 0,9, количество лейкоцитов 10 л, РОЭ 6 мм/ч, ревмопроба отрицательная. Лимфобластов 51% трансформированных клеток нелимфоидной природы 27%.5 Снижение степени трансформации лейкоцитов при выписке свидетельствует о нормализации клеточной иммунологической реактивности, что коррелирует с улучшением общего состоя- jlO ния больных ис другими лабораторными анализами. Таким образом, предложенный способ (таблица) позволяет в более короткие сроки (1-2 ч, а по известному is 72 ч) с более высокой точностью определить состояние клеточного иммунцтета и использовать его в качестве экспресс-метода при диагностике и

подборе лекарственной терапии зи ро ла та Соотношение количества ДНК-синтеующих клеток в культуре стимулианной ФГА и по известному и предаемому способам представлено в лице.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОЧНОГХ) ИММУНИТЕТА, включающий вьщеление лейкоцитов из крови, культивирование их и подсчет властных клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, культивирование лейкоцитов в концентрации 1,5-10 - 2,0-10 осуществляют на предметных стеклах при 4-8°С в течение 1 - 2 ч.