Способ идентификации самоопыленных линий кукурузы по компонентному составу зеина Советский патент 1985 года по МПК A01H1/06 

со

4;:

СО

со со Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к се лекции растений. Цель изобретения - повьппение точности при подборе пар для йолучения гибридов кукурузы. Самоопыленные линии кукурузы Кв захского НИИ земледелия НО 14 (6-е поколение), НО 16( поколение), НО 134 {6-е поколение), НО 139 (10-е поколение), НО 145 (8-е поколение) использовались в опыте. 10 зерен каждой линии индивидуально освобоягдают от зародьппа, эндосперм растирают в ступке, взвешивают и заливают 10-кратным количеством 2 М раствора мочевины в 70% этаноле, экстракцию проводят в центрифужных пробирках при постоянном перемешивании в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем пробирки помещают в водяную баню при 60-65с на 1 ч. Содержимое пробирок центрифугируют при 3000 g 15 мин. Супернатант переносят в бюкс и выпаривают до появления на верхнем обрезе бюкса пояска из крис- таялической мочевины. В бюкс добавляют 50 мг сахарозы и при помешивании ее растворяют. Экстракт зеина наносят на гель в количестве 0,040,06 мл в двух повторностях. 33I Электрофорез зеина осуществляют по известной методике в стандартном приборе Реанал (ВНР). Отличие состоит в том, что в гель вносят 6-7 М мочевину, используют столбики геля длиной 8-10 см, электродный буфер представляет собою 0,018 М уксусную кислоту, а время ЭрПектрофореза 80- 100 мин. Выявление компонентов зеина проводят в 7%-ной трихлоруксусной кислоте. Через 1-2 ч компоненты проявляются- пятью обособленными группами с относительными электрофоретическими подвижноетями (ОЭП) : 0-27 (группа А), 28-35, (группа В), 36-40 (группа с), 41-59 (группа D), 60-100 (группа Е). Расчет ОЭП проводят по наиболее подвижному, постоянно присутствующему во всех линиях зеиновому компоненту группы С-40. Предварительные и определенные значения режима экстракции, и элект- рофоретического деления зеина на составляющие его компоненты приведены в табл. 1-3. В табл. 1 показано влияние концентрации мочевииы в 70%-ном этаноле на полноту извлечения компонентов зеина из эндосперма зерна (линия НО 139). Таблица I

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ САМООПЫЛЕННЫХ ЛИНИЙ КУКУРУЗЫ ПО КОМПОНЕНТНОМУ СОСТАВУ ЗЕРНА, включающий размол зериа, экстракцию из него белка, электрофорез экстракта в полиакриламвдном геле в трубках, отличающийся тем, что, с целью повышения точности при подборе пар для получения гибридов кукурузы, экстракцию белков ведут спиртовым раствором мочевины, электрофорез экстракта осуществляют в поли- акриламидном геле, содержащем 6-7 М мочевину в уксуснокислой среде в трубках длиной 8-10 см, в течение 80-100 мин, причем идентификацию компонентов проводят по электрофоре- тической подвижности относительно компонента С 40. g (Л с

Характер растПроз- Прозрач- рач- ный вора после упаныйривания при 60-65С 8 Увеличени Число компо нентов зеина понентов Как видно из данныхтабл. 1,стабильный спектр по числу компонентов зеина достигается приизвлечении зеинов9го комплекса из зерен 2-ЗМ раствором мочевины в70%-ном этаноле,Оптимальной является концентрация мочевины 2М. Проз- Проз- Проз- Опалес- Кристал рачный рачный рачный цирую- лизация е числа комдо 12-15 щий мочевиСтабильно воспроизводи- мое число компонентов 21 В табл. 2 показано влияние концентрации мочевинььв полиакриламид- ном геле на четкость выявления компонентов зеина после электрофореза (линия НО 139).

компоДиффузия Диффузия компонентов 1-2 компоДанные табл. 2 свидетельствуют об оптимальной концентрации мочеви- лы в полиакриламидном-Пеле, равной 6 М.

Таблица 2

Четкое

Четкое нентов

В табл. 3 показано влияние ны столбика полиакриланидного

15 на проявление полногр спектра (линия НО 139). ,Таблица 3