Способ распознавания генотипов риса Советский патент 1990 года по МПК A01H1/08 G01N33/68 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к селекции и семеноводству, и может быть использовано научными учреждениями при изучении коллекции исходного материала, создания и паспортизации сортов риса.

Целью изобретения является упрощение анализа и повышение его точности и надежности.

Способ состоит в том, что проламины и определенная часть глютелинов (запасных белков эндосперма зерна) риса извлекается спиртовой мочевиной при нагревании, после электрофореза в полиакриламидном геле выявляются трихлоруксусной кислотой белковые компоненты, определяют относительную электрофоретическую подвижность (ОЭП) каждого компонента по реперному компоненту ВБО и на основе спектра составляют белковую формулу сорта (генотипа) риса.

П р и м е р 1. Зерна сортообразца риса Аист В размалывают до тонкого порошка. Отвешивают 500 мг муки, заливают ее 3 мл

70%-ного этанола, содержащего 2 М мочевины, перемешивают и инкубируют смесь 1 /2 ч при комнатной температуре, а затем в течение 1 ч при 60°С. После центрифугирования при 10 000 g в течение 15 мин надоса- дочную жидкость собирают и упаривают до 1/8 - 1/10 обьема, добавляют сахарозу до концентрации 20% и используют для электрофореза.

Полиакриламидный гель, содержащий 7,5% акриламида, 0,3 М уксусной кислоты и 8 М мочевины, полимеризуют в стеклянных трубках размером 110x5 мм с использованием в качестве катализирующей системы; сернокислого закисиого железа, аскорбиновой кислоты и пероксида водорода. На трубку наносят 50 - 100 мкл раствора белка и электрофорез ведут первые 30 мин при силе тока 2 мА на трубку, а затем 1 ч при сиЛе тока 4 мА на трубку. После завершения электрофореза гели извлекают из трубки и помещают в пробирки с 10%-ным раствором трихлоруксусной кислоты. Через 30 мин появляются белые полосы белковых компо

-ч

DS

ю

S

нентов, замеряют ОЭП их и составляют белковые формулы. Спектр делится на ясно различимые 4 субфракции: А (ОЭП О - 38); В (39 - 59); С (60 - 76) и D (77 - 100),

Исследования также показали, что при концентрации мочевины ниже 1,5 М и этанола ниже 65% число компонентов снижается из-за ухудшения извлечения запасного белка и соответственно уменьшается разрешающая способность способа (так для сорта Аист В остаются только наиболее интенсивные компоненты субфракции В). При использовании этанола в концентрации выше ,75% и мочевины выше 2,5 М наблюдается частичная клейстеризация крахмала эндосперма, что впоследствии препятствует эффективному концентрированию белкового раствора. В связи с этим белковые компоненты теряют четкость, а наиболее близкорасположенные сливаются в одно целое, нарушая электрофорбтическук) картину. При этом их количество также снижается. В этой связи признано целесообразным использовать мочевину в концентрации 1,5- 2,5 М в растворе этанола 65 -75%-ной концентрации (табл.2).

П р и М е р ы 2 - 11 осуществлякзт аналогично, но в исследования вовлечены другие сортообразцы. Реэультаты представлены в табл,1;

Предлагаемый способ надежен, обьек- тивен, экспрессен, позволяет распознавать

и паспортизировать близкие по происхож- дению генотипы риса, закладывать в память ЭВМ белковые формулы этих генотипов.

Формул а изобретения

Способ распознавания генотипов риса, включающий экстракцию из зерна запасных белков, их электрофоретическое

разделение и анализ полученных электро- фореграмм, отличающийся тем, что, с целью упрощения анализа и повышения его точности и надежности, экстракцию белков проводят 1,5 - 2,5 М мочевиной, растворенной в 65 - 75%-ном этаноле при нагревании, электрофоретическое разделение белков осуществляют в цилиндрических гелях, при этом в качестве каталитической системы полимеризации геля используют

закисное сернокислое железо, аскорбиновую кислоту и пероксид водорода, электро- фореграммы получают путем фиксации белковых компонентов трихлоруксусной кислотой без дополнительной окраски и в

результате анализа электрофореграмм проводят распознавание генотипов, определяя относительную электрофоретическую подвижность каждого компонента относительно реперного ВбО, группируя их в

субфракции в соответствии с их мобильностью, с последующим составлением специ- фических для генотипов белковых формул.

Та б л и ц а 1

Продолжение табл.1

cs «о

a- s с ю те f

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в сельском хозяйстве в селекционно-генетических исследованиях. Целью изобретения является упрощение анализа, повышение его точности и надежности. Способ состоит в том, что предлагают новые режимы экстракции запасных белков, изменяют процесс получения электрофореграмм и осуществляют их анализ, группируя компоненты в субфракции относительного реперного компонента В₅₀, после чего составляют белковые формулы, специфические для каждого сортообразца. 2 табл.