Способ распознавания генотипов самоопыленных линий кукурузы Советский патент 1988 года по МПК A01H1/06 

(/

С

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к селекции и семеноводству. Целью изобретения является повышение точности способа. Распознавание генотипов самоопыленных линий кукурузы проводится изозлектрофокусированием запасных белков, извлеченных спиртовым раствором мочевины из эндосперма, определением изозлектрических точек белковых компонентов, группированием их по субфракциям и составлением белковых фор- .мул, 1 табл.

«

ts3

со

Изобретение относится к сельскому I хозяйству, а именно к селекции и семеноводству, и может быть использовано научными учреждениями при создании I и паспортизации самоопьшенньпс линий |кукурузы/

Целью изобретения является повыпге- ние точности способа.

Способ заключается в том, что ин- дивидуальная экстракция белков из эндосперма индивидуальных зерен проводится на 2-3 зернах спиртовым раствором мочевины, изоэлектрофокусирование белков осуществляется в полиакрил- анидном геле, содержащем б моль мочевины и 2% амфолитов-носителей рН 4-9s что позволяет разделить белки на 3 субфракции: oi, р , Jf поспедующим определением изоэлектрических точек ком лонентов по белкам-маркерам и составлением стабильных характеристик формул для каждой самоопылениой линии

Способ осуществляется следующим Образом.

I Использовали различные самсопьшен- 1Йые линии кукурузы: Грушевская 380, ХЛГ-192, ВИР 33 ТС, HO-I4, НО-16, 1|10-139,

Белок из трех индивидуальных эндо 4пермов зерна кукурузы Ващеляют по следующей методике: растерный эндосперм заливают 10-кратным количеством /0%-ного этанола с 2 моль мочевины ri выдерживают 30 мин при в:омнатной температуре, а затем 60 мин при 60 С, Раствор бел:ка (объем 0,025 1чл) на- на 5%-НБ1й полиакриламидный илас .11инчать й гель, содержащий 6-моль моче врны и 2% амфолитов-носитеяей рН 4--95 размером 100x200x0,5 мм. Католитом с|пужит Oj,5 М раствор едкого калия, :: а|нолитом - 0,5 М раствор фосфорной кислоты. На параллельную дорожку на- н|осят смесь белков-маркеров с извест- н)1ми изоэлектрическими точками (ами- лЬглюкозядаза 3,5; ферритин 4,4; бМчий сьшороточный альбумин 4y7j j& лйктоглобулин 5 S 34 J .кональбумин мйоглобин лошади 7 3; миоглобин кита рыбонуклеаза 9j,45| цитохром 10,65).

Режим изоэлектрофокусирования: 1$ мин - 400 В; 15 мин - 800 В; 2 ч - iSOO В. После окончания изоэлектрофокусирования гель фиксируют л2,5%-ньгм раствором трихлоруксусной кислоты с 3t сульфосалидиловой кислоты, промгя- вйют 12,5%-ным раствором трихлорук

-

g s

5

О Q е

5

0

5

сусной кислоты и окрашивают 0,00 %-ным раствором кумассиг R-250, приготовленном на 12,5%-ной трихлоруксусной кислоте. Отмывку избыточного красителя производят 10%-ным раствором этанола в 5%-ной уксусной кислоте.

Для определения изоэлектрических точек разделенных белковых компонентов строят калибровочную кривую: ось по горизонтали размечают в мм, а на вертикальную ось наносят значения изоэлектрических точек. Измеряют расг стояние (мм), от катодного края геля до каждого из маркерных белков и по этим значениям строят кривую. Для определения изоэлектрической точки белкового компонента измеряют расстояние до него от катодного края геля и по калибровочному графику находят его изоэлектрическую точку.

Изоэлектрофокусировочные спектры (ИЭФ-спектры) белков самоопьшенных отиний кукурузы состоят из 3 четко вы раженных групп (субфракций) компонентов : oi , /3 , . od Субфракция представлена 16 компонентами слабой интенсивности, -суб.фракция состоит из 11-15 мощнь х по интенсивности компонентов, на долю которых приходится 80-90% всех белков, J -субфракция, наиболее бедная по числу компонентов (0-4) слабой интенсивности, об и ft-субфракции компонентов по характеру локализации их подразделяются на три части: ot, рН 4,00-4,80; od рН 4,81- 6,09; о:, рН 6,10-6,76; /}, рН 6,77- 7,20; 2 рН 7,21-7,55; Л, рН 7,56- 8,3.

J -Субфракция включает компоненты с изоэлектрическими точками в преде- лак 8,14-9,00, На основании ИЭФ-спек- тров составляются белковые формулы самоопыленных линий кукурузы, которые приведены в таблице.

Белковая формула специфично характеризует каждую самоопыленную линию, на ее основе паспортные цифровые данные линии можно хранить в памяти ЭВМ и использовать по мере надобности селекционерами и семеноводами з своей работе.

Использование предложенного способа распознавания гепотипов самоопыленных линий кукурузы позволяет на минимальном числе зерен (2-3 вместо 10) определять ИЭФ-спектры зеиновых и сопутствующих им запасных белков эндосперма, лишенньпс вариабельных

компонентов от зерна к зерну, и тем самым стабилизировать паспортизац1те самоопыленных линий кукурузы. Формула изобретения

Способ распознавания генотипов самоопыленных линий кукурузы,, включаю- щий извлечение спиртовой мочевиной зе- ина и сопутствующих ему запасных бел- Q ствии с их локализацией и интенсивно- ков эндосперма зерна, отличаю- стью и составлением специфических щ и и с я тем, что, с целью повыше- белковых формул.

ния точности способа, разделение белков ведут изоэлектрофокусированхем в полиакриламидном геле в диапазоне рН 4-9 с последующим определением изо- электрических точек компонентов, с использованием маркерных белков с известными изоэлектрическими точками, группированием компонентов в соответствии с их локализацией и интенсивно- стью и составлением специфических белковых формул.

ния точности способа, разделение белков ведут изоэлектрофокусированхем в полиакриламидном геле в диапазоне рН 4-9 с последующим определением изо- электрических точек компонентов, с использованием маркерных белков с известными изоэлектрическими точками, группированием компонентов в соответ