Способ выявления антигенов и специфических антител в биологических жидкостях при одномоментном исследовании Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

со

«lib J

isd

со Изобретение относится к биохимии а именно к способам иммунохимического определения антигенов и специфических антител в биологических жидкостях. Цель изобретения - повьппение чувствительности способа. Способ осуществляется следующим образом. На стеклянную пла стину равномерным слоем заливают гель агарозы в 0,05 М веронал-мединаловым буфере рН 8,6, причем на одну сторону пластины заливают гель, содержащий .специфическую антисыворотку к иссле дуемым антигенам, на противоположную сторону-полоску геля с антигено;-, а между шдан, в слое контактнЬго геля, располагают лунки для исследуемых образцов биологических жидкостей. Затем подготовленную пла тину помещают в специальную камеру для иммуноэлекТрофореза и производят электрофорез в постоянном электрическом поле с напряжением 1-5 В/см в течение 15-20 ч. При это положительный полюс располагают со стороны геля с антисывороткой, а отрицательный - со стороны геля с-антигеном. Марка агарозы, выбираемой для {сследования, зависит от подвижности определяемых антигенов Концентрации антигена и сыворотк;и в геле подбирают эмпирически в зависимости от вида антигена и .качества антисыворотки. При отсутстви антигенов и антител в исследуемом биологическом материале линия преципитании будет иметь вид. прямой параллельной полоске геля с антигеном, если в исследуемом материале присутствует антиген, иммунохимиче ки идентичный тестируемому, то линия преципитации сместится к аноду в виде пика, при наличии в пробе 23 антител, специфических тестируемому антигену-пик в сторону катода. Высота пиков прямо пропорциональна концентрации антигенов или антител в исследуемых биологических жидкостях. Пример. На пластину равномерным слоем заливают гель агарозы в 0,05 М веронал-мединаловом буфере, рН 8,6, причем на одну сторону пластины - гель, содержащий 5% антисыворотки против органоспецифического антигена сетчатки, а на противоположную сто.рону-полоску г.еля с экстрактом сетчатки. Между ними в слое койтактного геля располагают лунки с исследуемыми образцами (экстракт сетчатки, антитела к органоспецифическому антигену сетчатки, сыворотку больного увеитом, содержащую органоспецифический антиген сетчатки, сыворотку крови больного хориоретинитом, содержащую антитела к органоспецифическому антигену сетчатки, сыворотку донора). Подготовленную пластину помещают в камеру для иммуноэлектрофореза и проводят иммуноэлектрофорез с напряжением электрического поля 3 В/см в те.чение 18ч. По окончании электрофореза на пластине получена линия Преципитации, имеющая пики, направленные в сторону положительного полюса, и впадины, направленные в сторону отрица- тельного полюса. По величине полученных пиков и глубине впадин определена концентрация антигена и антител. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить чувствительность определения антигенов до 100200 нг/мл и антител до 200-400 нг/мл, т.е. в 10 раз по сравнению с протоТИПОМ.

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ПРИ одаомомЕнтном ИССЛЕДОВАНИИ путем инкубирования в геле «сследуемой жидкости с антигеном и специфической к нему-антисыворотЬой с последующим, определением полос преципитации, о тл и - чающийся тем, что с целью повьшения чувствительности спЬсоба, инкубирование исследуемой жидкости антигейа и специфической антисыворбтки осуществляется в постоянном электрическом поле с напряжением 1-5 В/см, при этом лунки в контактном геле, содержащие исследуемую жидкость, располагают между зонами i I геля с антигеном и геля с антисывороткой.W