Способ определения наличия спермы в судебно-медицинском исследовании пятна Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

со

С

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам обнаружения спермы в составе пятен при судебно-медицинском исследовании и других областях медицины. Цель изобретения - повышение чувствительности и сокращение времени анализа, упрощение способа. Материал с пятном спермы измельчают, экстрагируют при 45-50°С в течение 30-40 мин, затем к экстракту добавляют формальдегид до конечной концентрации 1-1,5% и проводят встречный иммуноэлектрофорез с моноспецифической антисывороткой к простатическому бета-глобулину и при появлении линии преципитации выявляют в пятне сперму. В сравнении с прототипом сокращается время анализа в 15 раз, чувствительность анализа - в 10 раз. При этом происходит упрощение способа за счет исключения этапа центрифугирования.

Изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии и может быть использовано в частности для обнаружения спермы в составе пятен при судебно-медицинском исследовании, в акушерско-гине- кологических исследованиях, в андрологии.

Целью изобретения является сокращение времени, повышение чувствительности анализа и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Экстракцию пятен проводят 30- 40 мин при 40-45°С, далее ал,иквоту экстракта смешивают с равным объемом 2-3%-ного раствора формальдегида на ве- ронал-мединаловом буфере и исследуют во встречном иммуноэлектрофорезе с моноспецифической антисывороткой к простатическому бета-глобулину (ПБГ) и при

положительной реакции судят о наличии спермы.

Пример. Кусочек марли с пятном белесого цвета размером не более 0,5 см2 измельчают нохницами и помещают в пробирку, содержащую 0,9% раствора хлористого натрия. Экстракцию проводят на водяной бане при 45 С в течение 40 мин. Затем отбирают из этой пробирки 10 мкг экстракта и в титровальной доске смешивают с Юмкг 2%-ного раствора формальдегида на веронал-мединаловом буфере. Далее на стеклянной пластине размером 5,0 х 20.0 см, залитой 1 %-ным агаром на веронал-мединаловом буфере пробивают два ряда лунок диаметром 2,0 мм на расстоянии одного ряда от другого в 4,0 мм. Анодный ряд заполняют моноспецифической антисывороткой к простатическому бета-глобулину, а катод

О 00

ю ю со

ный ряд - последовательными разведениями исследуемых образцов. Каждый образец берут в четырех разведениях (1/2; 1/16; 1/64; 1 /256), в каждую лунку вносят по 5 мкл. Как минимум в двух разведениях ставят в каждом опыте стандартный препарат ПБГ.

Оценку результатов проводят через 30- 40 мин после завершения электрофореза. Исследуемый образец дает линию преципитации с антисывороткой в разведении 1/64 и 1/128. Делается заключение о наличии спермы в составе пятна.

Предлагаемый способ дает возможность установить наличие спермы в самых разных смесях и пятнах. При этом время исследования сокращается от 30-40 до 2i- 3 ч, так как иммунодиффузионное определе- ние простатического бета-глобулина заменяется встречным иммуноэлектрофо- резом, а экстракция проводится при новы- шенной температуре. Эти изменения стали возможны после изучения физико-химических свойств ПБГ. Наряду с сокращением сроков исследования способ уменьшает набор необходимого оборудования, так как не

проводится центрифугирование. Используется встречный .иммуноэлектрофорез, что повышает чувствительность способа в 10 раз (по известному способу удается обнаружить сперму по концентрации ПБГ равной 5 мкг/мл. а по предлагаемому способу - 0,5 мкг/мл).

Формула изобретения

Способ определения наличия спермы в судебно-медицинском исследовании пятна путем измельчения материала с пятном, экстракции, иммуноанализа и при наличии полос преципитации с разведениями сыворотки к простатическому бета-глобулину определяют наличие спермы в пятне, о т- личающийся тем. что, с целью повышения чувствительности и сокращения сроков анализа, упрощения способа, экстракцию пятен проводят при 45-50°С в течение 30- 40 мин, затем к экстракту добавляют формальдегид до конечной концентрации 1-1,5%. а иммуноанализ осуществляют с помощью встречного иммуноэлектрофореза.