Способ получения сисомицина и штамм @ @ @ 1/109-продуцент сисомицина Советский патент 1985 года по МПК C12P1/04 C12P1/04 C12R1/29 

Изобретен1е относится к микробиологической промьшшеиности, в частности к производству антибиотиков.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Штамм Micromonospora rosea SI/109 .характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Макроскопическое наблюдение 10-дневной культуры, выращенной при 37 С на среде Чапека, показьшает удовлетворительное развитие, отсутствие образования воздушного мицелия, образование вьшуклых нормальных круглых оранжево-желтовато-черных колоний, отсутствие растворимого пигмента .

При микроскопическом наблюдении обнаруживаются длинные разветвленные нормальные нити без разделительной перегородки, диаметр 0,5 М, споры круглые до яйцеобразных расположены в простьгх спорангиях диаметром

1-1,5f .

Пептон - желез-о - агар. Рост слабый, цвет грязно-желтый, немного серый; небольшой споровый слой; растворимый пигмент отсутствует.

Агар Эмерсона. Рост слабый. 12 колоний, оранжевые, светлые, слегка коричневые.

Глюкоза - оранжевый экстракт агар. Рост удовлетворительный, цвет ярко-оранжевый, слегка черный, колонии сильно сморщенне.

Питательный агар. Рост удовлетворительный, цвет колоний ярко-оранжевый, слегка черный.

Агар Чапека. Рост удовлетворительный, цвет ярко-орг1нжевый, затем черньш.

Агар Беннетта. Рост удовлетворительный, цвет слабо-оранжевый, слегка коричневый, образует растворимый пигмент.

Ломтики картофеля (с карбонатом кальция и без него). Рост в следах, цвет оранжевый.

Физико-биохимические признаки. Хорошо растет при 28-37 С и не развивается при 44 С. Усвоение углеводов (проверка на среде, содержащей 0,5% дрожжевого экстракта, 1% источника углерода, 0,1% СаСО, 1,5% агара и дистиллированную воду). Усваивает ксилозу, фруктозу, глиэкозу.

008542

сахарозу, крахмал, рибозу; хуже усваивает галакГозу, рафннозу, дульцит; плохо усваииает арабинозу, рамноз, , лактозу, маннит, инозит.

5 Ассимиляция азота (определение на среде, содержащей 1%-ную глюкозу, 1,5% агара, дистиллированную воду).

Хорошо усваивает 0, дрож0 жево экстракт, 1 %-ный N-Z-амин, посредственно - 1%-ный аспарагин, плохо - %-ную глутаминовую кислоту и 1%-ный нитрат аммония.

Желатин, молоко, и крахмал гидра15 лизует. Нитрат в нитрит восстанавливает. Максимальная солевая допустимость для натрий хлорида 2%.

Пример i . По 1 мл, содержащему 10 -10 клеток штамма 5 1/109,

20 хранившегося при -20 С, г иосят в серию колб емкостью 3000 мл, каж,иая из которых содержит 800 мл стер1шьHoii среды, содержащей триптона (Oxoid) 5 г, соевой муки 10 г,

5 растворимого крахмала 20 г, глюкозы I г, карбоната кальция 2 г, водопроводной ВОДЬ до 1000 мл.

Культивирование проводят при 28 С в течение 3 дн при постоянном перемешивании со скоростью 260 об/мин.

/1ля приготовления инокулята полученн то в предыдущей стадии культуру пересеивают в 100 л стерильной среды следующего состава: соевая

5 мука 10 г, панкреатический гидролизат казеина (по сухому весу) 5 г, картофельный крахмал 22 г, глюкоза 10 г, углекислый кальций 2 г, пальмовое масло 2 г, водопроводная

0 вода до 1000 мл рН среды перед стерилизацией 7,0.

Культивирование проводят в течение 36-48 ч при 30 С и постоянном перемешивании со скоростью 400 об/мин

5 и скорости аэрации 1/1 V/Y. Пальмовое масло добавляют в ка шстве пеногасителя.

100 л ферментационной среды следующего состава, г: соевая мука

0 40, пептон 10, картофельный крахмал 10, декстрин 25, глюкоза 5, углекислый кальций 4, гептагидрат сернокислого йагния 2, гептагидрат cep ioкислого железа 0,2, гоксагидрат азотнокислого кобальта 0,0008, пальмовое масло 2, водопроводная вода до 1, инокулируют 10 л инокулятора. Ферментацию проводят при перемешиваНИИ со скоростью 400 об/мин в течение 1 ч при 121С, давлении 1,31,4 атм, скорости аэрации 1/1 V/Y ферментационной среды до стерилизации 8,0; ферментагщю ведут в ферментаторе из нержавеющей стали.

Продукция антибиотика начинается с 35-40 ч ферментации и достигает максимума к 110-120 ч. Время окончания ферментации устанавливают турбилиметрическим способом.

В конце ферментации общая активность культуральной жидкости состав ляет 650 Е/мл в пересчете на стандарт сисомидина flE соответствует активности 1 мкг стандарта сисоми- цинового) основания по отнощению к стафилококку эпидермидиса; определение проводилось методом диффузии в агар).

П р и м е р 2. Полученный по примеру 1 инокулят в количестве 100 л вносят в 1 м ферментационной среды следующего состава, г: соевая мука 40, панкреатический гидролизат казеина (по сухому весу) 10, кукурузный крахмал 50, глюкоза 5, угле008544

кислый кальций 4, гептагидрат сернокислого магния 2, гептагндрат сернокислого железа 0,2, гексагидрат азотнокислого кобальта 0,0008, пальмовое масло 2, водопроводная вода до до I л.

рН среды перед стери,:тизацией 8,0, Стерилизацию среды, перемеи1ивание и аэрацию культуральной жидкости проводят согласно примеру 1.

Общая активность культуральной жидкости составляет 680 Е/мл. 15 г выделенного чистого основания растворяют в 60 мл дистиллированной

15 воды и с помощью 5 н, раствора серной кислоты устанавливают рН 4,3. Раствор перемешивают с 1,5 г активированного угля в течение 30 мин и фильтруют через фильтр Зейтуа.

20 Фильтр трижды промьшают деионизированной водой по 5 мл и объединенные фильтраты при перемешивании выливают в 1 л метанола. После охлаждения осадок отфильтровывают, мромы25 вают трижды по 50 мл метанолом и сушат в вакууме при 50 С. Получают 22 г сернокислой соли сисомицина.

1. Способ получения сисомицина путем культивирования штамма - продуцента вида Micromonospora в аэробных условиях в питательной среде, содержащей источники углерода и азота и минеральные соли, с последующим вьщелением целевого продукта в виде основания из культуральной жидкости, при необходимости очисткой его и переводом в соль, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта в качестве продуцента используют штамм Micromonospora rosea SI/109 MNG 00182 и культивирование проводят В ферментационной питательной среде, содержащей, г/л воды: Соевая мука 40 Пептон или гидролизат казеина 10 Картофельный или кукурузный крахмал 10-50 Глюкоза5 Углекислый кальций 4 Гептагидрат сернокислого магния2 I Тептагидрат сернокис(Л шого железа0,2 Гексагидрат азотнокислого кобальта 0,0008 Пальмовое масло 2. 2. .Способ поп., отличающийся тем, что питательная среда дополнительно содержит декстрин или растворимьш крахмал в количестве 20-25 г/л воды. 3.Способ поп.1,отличающ и и с я тем, что сисомицин - основание переводят в сернокислую соль сисомицина. 4.Штамм Micromonospora rosea SI/109, MNG 00182 (Венгерская национальная коллекция, Будапешт) - продуцент сисомицина.