Способ определения устойчивости эритроцитов Советский патент 1986 года по МПК A61B5/00 G01N33/48 

- t

Изобретение относится к медицине а именно к способам определения мембранных нарушений у новорождённых при различных. цатоПогических процессах, сопровождающихся изменениями липид- ной пероксидации.

Цель изобретения - сокращение количества крови, необходимого для анализа, и времени определения.

Пример осуществления способа, 0,15 мл (3-4 капли) крови помещают в пробирку с 3 мл физиологического раствора с цитратом натрия (100 мл+ f 20 мл 0,2 N раствора соответственно). Эритроциты трижды отмывают физраствором и 0,07 мл отмытых эрит- .роцитов разбавляют 1,33 мл 25 m М Трис-НС1. буфера (,4). Затем в три пробирки помещают по 0,4 мл , взвеси эритроцитов. В первую пробирку добавляют 0,43 мл буфера и 0,02 мл 1%-ного раствора сапонина, во вторую - 0,45 МП буфера, в третью - 0,3 мл Ьуфёра :+ 0,1 мл 0,5 мМ аскорбата и 0,05 мл 0,3 мМ раствора сернокислого железа. Вторую и третью пробирки помещают в баню при 37°С на 10 мин, непрерьшно помешивая, затем центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин и в надосадочной жидкости определяют выход гемоглобина по отношению к пробе с полным гемолизом (проба № 1 с сапонином). При этом надосадоч- ную жидкость переносят в кювету для счета пастеровской пипеткой и после измерения экстинции при 532 им полностью сливают в ту же пробирку, перемешивая осевшие р,оциты. Затем в эту же пробу добав- ,ляют 0,5 мл 30% ТХУ, 0,15 мл 5 н. Ъоляной кислоты и 0,6 мл 0,67%-ной тиобарбитуровой кислоты. Пробы. встряхивают и ставят в баню при 90- на 20 мин,, развившуюся окраску после осаждения осадка спектрофо- тометрируют при 532 нм. Расчет про

3,05+0,75

6,06+0,35

19967 , 2

водите по коэффициенту молярной экстинции, равному 1,56 х 10, и ответ выражают в наномолях мало- нового диальдегида (МДА) на 10

5 эритроцитов.

Б таблице показано количество МДА. в эритроцитах, степень гемолиза эритроцитов и коэффициент устойчивости (отношение этих параметров)

0-у доношенных и недоношенных детей в первые 10 дней их жизни.

Как видно из таблицы, у недоношенных детей с небольшим сроком недоношенности (гестационный воз15 раст 36 недель) и без видимых отклонений в весе тела и развитии /наиболее благополучные новорожденные, 1 группа степень гемолиза и количество МДА в эритроцитах вьш1е,

0 чем у доношенных новорожденных, тогда как коэффициент устойчивости у первых не изменен. Эти данные указывают на то, что у недоношенных детей I группы, несмотря на повы5 шенное образование МДА в эритроцитах, нет его накопления и, видимо, структурно-функциональные свойства эритроцитов не нарушены. У недоношенных детей II группы с тем же гес0 тационным возрастом, но с внутриутробной гипотрофией (маловесные к сроку), отмечается еще большее количество МДА в эритроцитах, но без увеличения их..аутогемолиза в условиях.in vitro. .Коэффициент устойчивости значительно увеличен, Еще более повьш1енным этот коэффициент у детей с глубокой недоношенностью, у которых чаще отмечаются энцефгшопатии (наиболее неблагополучные дети) .

Таким образом, коэффициент устойчивости пропорционален степени устойчивости мембран эритроцитов и указьгоает на степень изменения структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов.

0

2,16+0,42 0,54+0,10

3,83+0,30 0,65+0,063

il группа не- доиошенных детей ,89+0,32 4,60+0,42 1,77±0,22

ГО группа недоно .

шенных детей,.L,-4. ««

П 142,50+0,45 5,83+0,62 2,92+0,65

,05 с группой доношенных новорожденных, Р 0,05 с I группой недоношенных детей.

1219967

Продолжение таблицы