Способ электрохимического определения этилового спирта и ферментный электрод для его осуществления Советский патент 1987 года по МПК G01N27/46 

11

Изобретение относится к исследованию и анализу материалов путем определения электрохимических параметров точнее путем измерения тока ферментных реакций при электролизе, и может быть использовано для определения этилового спирта в крови и других би- олопгческих жидкостях.

Цель изобретения - увеличение чув- ствительности и селективности определения этилового спирта.

Электрод для осуществления способа, содержащий алкогольоксидазную мембрану, изготавливают из стеклоуг- лерода, а в слой мембраны дополнительно вводят пероксидазу в количестве, в 10-50 раз превышающем количество алкогольоксидазы.

В алкогольоксидазной мембране, со- держащей пероксидазу, в присутствии ферроцианида калия протекают следзао- щие процессы:

Алкогольоксидаза „

+ Ог- -CtLCOH+Ha;

- 2 2,25 этом потенциале.

Согласно предл ределению не меща щества, как мочев кислоты, аминокис но находятся в ре ких растворах, та электрохимически

Н„0„ 4- ( 2Н Пероксидаза

(CN) HjO.

Восстановление образовавшегося феррицианида проводят при 0,0 В отн, Ag/AgCl электрода.

Увеличение селективности способа обусловлено тем, что цри использовании электрода из стеклоуглерода, содержащего в алкогольоксидазной мембране пероксидазз ; и в присутствии в буферном растворе феррицианида калия электролиз проводят при потенциале 0,0 В отн. Ag/AgCl электрода, при котором не окисляются другие коьтонен- ты биологических растворов: аскорбиновая и мочевая кислоты, аминоккспо- ты, кислород и т.д.

Пример 1. ВО,2 мл 0,1 М фосфатного буферного раствора (рН 7,2) растворяют 16 мг альбумина,10 мг пероксидазы и 0,2 мг алкогольоксидазы. Смесь-перемешивают, добавляют 2 мкл 5%-ного раствора глутарового альдегида в том же буфере и выливают на диализную мембрану с алощадью поверхности 3 см. Высушенную мембрану толщиной около 0,05 мм накладывают на стеклоуглеродньгй электрод таким образом, чтобы ферментный слой непосредственно контактировал с электродом. Далее электрод погружают в Oj,l М фосфатный буфер (рН 7,2), содержащий I мМ этилендиамин-К,Ы,Н;Н - тетрауксусной кислоты (ЭДТА), 1,5 ферроцианида калия (степень разбавления образцов - 20 раз) и добавлянзт этиловый спирт.

При потенциале 0,0 В отн. Ag/AgCl электрода определяют ток электрода.

Данные измерен1-1й првиедены в таблице.

Предел обнаружения (С„1,„ 0,95) этилового спирта равен О, 12мМ, т.е. 6 мкМ в измерительной ячейке.

Согласно предлагаемому способу определению не мещают органические вещества, как мочевая, аскорбиновая кислоты, аминокислоты, которые обычно находятся в реальных биологических растворах, так как они являются электрохимически неактивными при

0

5

0

5

0

5

Формула изобретения

1.Способ электрохимического определения этилового спирта, включающий электролиз исследуемого вещества в буферном растворе в диапазоне рН 7,0-8,0 с использованием ферментного датчика с последующим измерением тока, по которому определяют концентра- Щ1Ю этилового спирта, отличающийся тем, что, с целью увелит чения селективности определения, перед электролизом в исследуемый буферный раствор дополнительно вводят фер- рицианид калия в концентрации 1,0- 1,5 мМ и измерение катодного тока проводят при 0,0 В отн. Ag/AgCl электрода,

2.Ферментный электрод для определения этилового спирта, содержащий твердьш электрод с расположенной на нем ферментной мембраной на основе алкогольоксидазы, отличающийся тем. что, с целью повьше- ния селективности и чувствительности определения, электрод выцолнен из стеклоуглерода, а слой ферментной мембраны дополнительно содержит пероксидазу - в количестве, в 10-50 раз превьщтающем количество алкогольоксидазы.

Изобретение относится к области исследования и анализа материалов путем определения электрохимических параметров. Цель изобретения - повышение селективности и увеличение технических возможностей. В данном способе в алкогольоксидазную мембрану вводится пероксидаза в 10-50-кратном избытке по сравнению с алкогольоксидазой, а электролиз проводят в нейтральной либо слабощелочной среде в присутствии ферроцианида калия в концентрации 1,0-1,5 . По данному способу производится экспрессный контроль этилового спирта в крови, при этом повышается чувствительность и селективность определения. 2 с..п.ф-лы, 1 табл. с в (Л оо 1С О5 со ч СХ)