Способ определения авидности антител Советский патент 1986 года по МПК A61K39/00 G01N33/53 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения авидности антител в различных иммунных сыворотках.

Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет определения двух основных признаков авидности антител: скорости и полноты связывания одновременно одним методом.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят реакцию непрямой иммуно- флуоресценции с иммунными сыворотками на предметных стеклах с мазками из тест- штамма бактерий, при этом результат реакции учитывают микрофлуорометрией.

Скорость связывания антител с антигеном определяют как процент интенсивности свечения на 1,3, 5-й мин к 20-й мин протекания реакции, а полноту связывания - как интенсивность свечения в милливольтах на 20-й мин.

Пример 1. Сравнение авидности антител в трех мелиоидозных гипериммунных сыворотках.

Готовят мазки из взвеси типичного ме- лиоидозного штамма с концентрацией 10 мелиоидозных тел в 1 мл. Исследуемые сыворотки (А, Б, В) в рабочем разведении наносят на мазки и инкубируют каждую 1, 3, 5 и 20 мин на отдельном мазке (стекле). Промывают препараты и наносят на них люминесцирующую сыворотку против иммуноглобулинов того вида, от которого получены гипериммунные сыворотки, в соответствующем рабочем разведении. Инкубируют 20 мин и промывают. Препараты микроско- пируют и измеряют интенсивность свечения с помощью микрофлуорометрии с применением фотонасадки и лю.минесцентного микроскопа, интенсивность выражают в милливольтах выходного напряжения фотоумножителя. Подсчитывают процент интенсивности свечения на 1, 3 и 5-й мин к 20-й мин и анализируют полученные результаты (см. таблицу).

Иммунные Процент интенсивности Интенсивность сыворотки свечения к 20-й мин на: свечения на

20 мин, мВ

I мин 3 мин 5 мин 20 мин

А42 77 93 100310

Б32 61 84 100280

, В30 46 61 100260

Процент нарастания интенсивности свечения характеризует скорость связывания антиген антителами, а абсолютная величина ее на 20-й мин - полноту связывания.

По этим критериям авидность антител в гипериммунной мелиоидозной сыворотке А наивысшая.

Таким образом, способ позволяет уско- рить определение авидности антител в 3-4 раза по сравнению с известным способом и упростить его за счет определения двух параметров авидности не в двух отдельных опытах (по известному способу), а в одном.

Формула изобретения

Способ определения авидности антител путем взаимодействия антител с антигеном с последующим учетом результатов реакции, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, учет реакции осуществляют с помощью микрофлуорометрии в реакции непрямой иммунофлуоресценции и определяют интенсивность свечения, при этом скорость связывания определяют как процент интенсивности свечения на 1,3, 5-й мин к 20-й мин, а полноту связывания - как интенсивность свечения на 20-й мин.

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения авидности антител в различных иммунных сыворотках. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет определения двух основных признаков авидности антител: скорости и полноты связывания одновременно. Проводят реакцию непрямой иммуно- флуоресценции с иммунными сыворотками на предметных стеклах с мазками из тест- штамма бактерий. Результат учитывают с помощью микрофлуометрии. Скорость связывания антител с антигеном определяют как процент интенсивности свечения на 1,3 и 5-й мин к 20-й мин протекания реакции, а полноту связывания - как интенсивность свечения в милливольтах на 20-й мин. 1 табл. N9 сд оо