Способ идентификации вида стафилококка Советский патент 1986 года по МПК A61K39/85 

1

Изобретение .относится к медицине, в частности к иммунологическим способам определения бактерий.

Целью изобретения яЕи1яется увеличение точности идентификации различных видов рода Staphylococcus независимо от их штам- мовой принадлежности и наличия белка А на основе определения поверхностных клеточных видоспецифических антигенов.

Поставленная цель достигается проведением реакции непрямой гемагглютинации анализируемой культуры стафилококка на стекле в течении 0,5-3 мин с различными и мм у ногл обул и новым и диагности кумами: эритроцитами, сенсибилизированными IgG

10

В этом случае идентифицируется золотистый стафилококк Staph. aureus с высоким содержанием белка А.

Положительная реакция антивидового диагностикума при отсутствии агглютинации других диагностикумов свидетельствует об отсутствии у идентифицируемого штамма протеина А, причем в этом случае вид стафилококка соответствует гомологичной сыворотке против Staph. epidermidis, Staph. aureus или Staph. intermedius.

Реакция агглютинации I -диагностику- ма и одного из видовых диагностикумов при отсутствии агглютинации других диагностикумов свидетельствует о наличии стафилококка, гомологичного вида Staph. epidermiчеловека (из нормальной сыворотки), зрит- 15 dis или Staph. intermedius, но содержащего

роцитами сенсибилизированными антивидо- выми стафилококковыми сыворотками и эритроцитами, сенсибилизированными контрольными нормальными кроличьими сыворотками от тех же кроликов до иммунизации. При агглютинации всех используемых диагностикумов идентифицируют вид Staph. aureus с высоким содержанием белка А; при агглютинации только антивидового диагностикума идентифицируют гомологичный вид

20

белок А.

Пример. Суспензии 25 штаммов стафилококка, выделенные от больных и носителей, анализировали перед описанным способом с использованием только антивидовых диагностикумов и по способу идентификации стафилококка независимо от вида с тремя типами диагностикумов. При определении вида по агглютинации двух антивидовых антительных диагностикумов (против золотистого и

Staph. epidermidis, Staph. intenmedius или 25 эпидермального стафилококка) четыре куль- Staph. aureus с низким содержанием белка А; при агглютинации IgG-диагностикума, антивидового диагностикума и отсутствии агглютинации других используемых диагностикумов идентифицируют гомологичный вид- Staph. eridermidis или Staph. intermedius с 30 наличием белка А.

туры были отнесены к виду «Золотистый и три к виду «Эпидермальный. Видовая принадлежность 18 культур не была определена из-за агглютинации обоих использованных типов диагностикумов. При определении вида с помощью трех типов диагностикумов 18 культур были отнесены к виду Staph. aureus с высоким содержанием белка Ai 4 культуры - к виду Staph. aureus без белка А, 3 культуры - к виду Staph. epidermidis. Доля идентифицированных штаммов повысилась с .28% по известному способу до 100%, что свидетельствует о большей точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Выделенную культуру стафилококка, подлежащую видовой идентификации, взятую петлей с плотной питательной среды или в виде капли густой смеси (5-20 млрд микробных тел в 1 мл по оптическому стандарту), вносят в каплю каждого из диагностикумов, находящихся на пpeдмeтнoмcтeклe:IgG-диaг- ностикума, антивидовых диагностикумов (против Staph. aureus, Staph. epidermidis, Staph. intermedius), контрольных диагностикумов, соответствущих каждому из видовых. Капли тщательно перемешивают петлей или стеклянной палочкой и учитывают результат реакции визуально через 0,5- 3 мин по образованию характерного агглюти- ната. Используемый эритроцитарный диагностикум готовят риванольным методом, а антивидовые диагностикумы - путем конъюгирования эритроцитов с антисыворотками с помощью амидола.

Положительная реакция всех использованных диагностикумов возможна при взаимодействии этих иммуноглобулинсодержа- щих препаратов с поверхностным протеином А стафилококка. Такая реакция проявляется только в отношении богатых протеином А штаммов золотистого стафилококка.

0

В этом случае идентифицируется золотистый стафилококк Staph. aureus с высоким содержанием белка А.

Положительная реакция антивидового диагностикума при отсутствии агглютинации других диагностикумов свидетельствует об отсутствии у идентифицируемого штамма протеина А, причем в этом случае вид стафилококка соответствует гомологичной сыворотке против Staph. epidermidis, Staph. aureus или Staph. intermedius.

Реакция агглютинации I -диагностику- ма и одного из видовых диагностикумов при отсутствии агглютинации других диагностикумов свидетельствует о наличии стафилококка, гомологичного вида Staph. epidermi5 dis или Staph. intermedius, но содержащего

dis или Staph. intermedius, но содержащего

белок А.

Пример. Суспензии 25 штаммов стафилококка, выделенные от больных и носителей, анализировали перед описанным способом с использованием только антивидовых диагностикумов и по способу идентификации стафилококка независимо от вида с тремя типами диагностикумов. При определении вида по агглютинации двух антивидовых антительных диагностикумов (против золотистого и

эпидермального стафилококка) четыре куль-

туры были отнесены к виду «Золотистый и три к виду «Эпидермальный. Видовая принадлежность 18 культур не была определена из-за агглютинации обоих использованных типов диагностикумов. При определении вида с помощью трех типов диагностикумов 18 культур были отнесены к виду Staph. aureus с высоким содержанием белка Ai 4 культуры - к виду Staph. aureus без белка А, 3 культуры - к виду Staph. epidermidis. Доля идентифицированных штаммов повысилась с .28% по известному способу до 100%, что свидетельствует о большей точности способа.

Способ идентификации вида стафилококка дает также дополнительную информацию о содержании белка А у исследуемых штаммов. Эти сведения, а также быстрота и высокая точность способа могут быть использованы для уточнения этиологии бактериальных заболеваний, вызываемых стафилококком и более обоснованного лечения больных.

Формула изобретения

Способ идентификации вида стафилококка путем определения видоспецифичных антигенов в реакции непрямой гемагглютинации с эритроцитарными диагностикумами, сенсибилизированными антисыворотками к различным видам рода Staphylococcus, огли- чающийся тем, что, с целью увеличения точности способа, дополнительно для проведения реакции гемагглютинации используют контрольные эритроцитарные диагностикумы, сенсибилизированные I(G человека из нормальной сыворотки и сенсибилизирован1277966

ные нормальными сыворотками животных,фицируют Staph. epidermidis, Staph. intermeявляющихся продуцентами антисывороток кdius или Staph. aureus с низким содержаразличиым видам стафилококка, и при на-нием белка А, при агглютинации с

личии агглютинации со всеми диагностику-lgG-диагностикумом и с антивидовыми диагмами идентифицируют Staph. aureus с высо-j ностикумами идентифицируют Staph. epiderким содержанием белка А, при агглютинацииmidis или Staph. intermedius, содержащее

с антивидовыми диагностикумами иденти-белок А.

Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - увеличение точности способа. Культуру стафилококка смешивают с IgG-диагностикумом, антивидовыми и контрольными диагностикумами, соответствующими каждому из видовых. Результат реакции учитывают по образованию характерного агглютината. Эритроцитарный IgG-диаг- ностикум готовят риванольным методом, а антивидовые - путем конъюгирования эритроцитов с антисыворотками с помощью амидола. При наличии агглютинации со всеми диагностикумами идентифицируют золотистый стафилококк с высоким содержанием белка А. При агглютинации с антивидовыми диагностикумами идентифицируют эпи- дермальный стафилококк или золотистый с низким содержанием белка А и Staphylococ- сцз intermedius. При агглютинации с диагностикумами и с антивидовыми диагностикумами идентифицируют эпидермаль- ный стафилококк или Staphylococcus intermedius, содержащие белок А. (Л Ю | ;о О5 СП)