Штамм @ @ @ 5003 т-1,используемый для получения протеазы холерного вибриона Советский патент 1986 года по МПК C12N15/00 C12N9/00 C12N15/00 C12R1/19 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использонано для получения протеазы холеркого вибриона .

Цель изобретения - создание баз- опасного штам1-1а, способного нродуци ровать протеазу холерного вибриона,

Штам1-1 Escherichia coli Q,L1 5003 Т-1 получен путем котранссрормации с .ДНК векторной плазмиды pBR 322, не- реданной в клетки бесплазмидного штамма кишечной палочки РД 5003. Штамм несет плазмиду pViB возбудителя холерь, определяющую синтез протеазы, Плазмида стабильно насле- дуется в клетках нового хозяина и сообщает ему способность расти на .модифицированной активно-диагностической среде следующего состава, г/л: CaCl ,0,lf MgSO, 0,1; ZnSO. 0,05; NaCl 5,0; NaHCO, 0,25: агар Дифко 10; желатина 10; рН 7j2-7,3, Желток смешивают в объеме 1:i с физиологическим раствором и добавляют 70 мл этой эмульсин на 1 л готовой среды, охлаж:д,енной др 40-45 С.

Штамм Escherichia coli QII 5003 Т-1 депонирован в Коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации н контроля медицинских, и биологически препаратов им. Л.А.Тарасевича под № 128 и характеризуется следу-ощими признаками.-

Культурально-морфологические признаки.

Клетки штамма 128 з мазках из суточной культуры имеют вид коротких палочек 1,0-250 х 0,,,4 мкм. Неподвижные. Грамотрицательные Полиморфизм выражен умеренно.

На агаре LB образуют мутные колонии серовато-белого цвета.

На агаре Хоттингера (рН 7,6) образуют мутные колонии, серовато-белы

Бульон Хоттингера - вызывают помутнение бульона, рост диффузнь1й,

Устойчивы к ампициллину (более 100 мкг/мл). Зависят от пролина.

Лизируются кишечными фагами Т-7 и vir.

Сбраживают с образованием кислот и газа лактозу, глюкозу,, арабинозу, маннозу, галактозу. Не ферментируют сахарозу,

05р азуют вибрноцин, коагулазу, фибринолизин и лецитиназу.

0

5

0

5

0

5

,

0

Шт.гмм авируле.;-1тен для белых мышей и морских свинок при подкожном, аэрозольном и внутриконъюнктивальном методах заражения, а также при внутри- кишечном заражении на модели кроликов-- со сунко з в дззе до 0 м,кл.

Штамм несет дзе плазмиды pBR 322 и рЛ/ib с молекул.чрной массой 2,8 и ,,2 мегадальгон соответственно, р Vib плазмида позволяет штамму в контролируемых условиях образовывать протеазу, аналогичную ферменту, .продуцируемому родительским штаммом Vibrio eltor Р-9898. Использование штамма иллюстрир ется следуюш;ими примерами.

II р и м е р . Суточную агаро- вуго культурЗ и1тамма Escherichia coli 128 стерильной палочкой или плйтино- .вой петлей наносят на пластину вьше- описанной диагностической среды в виде макроколонии.

Посевы инкубируют при 37°С в течение 24-А8 ч. Учет продукции протеазы производят по образованию циркулярных зон просветления вокруг посева. В качестве контроля используют бесплаз г мидный штамм Escherichia coli QД 5003, не способный к продукции протеазы и не растущий на элективной среде.

Пример 2 .. Культуры штамма 28 и контрольных Ш1 аммов засевают в 1 %-ну1о пептонну о воду в дозе 10 кл,/мл к .выращивают на качалке в течение 18 ч при 37 С. Клетки отбрасывают центрифугированием, а в надоса,цочной жидкости определяют активность протеазы с ггспользованием азаказеина в качестве субстрата. Результаты выража-от в условных единицах активности з мл культураль- иой Ж1ЩКОСТИ в пересчете на 1 оптическую единицу мутности выросших - культур.

Сра знительныв ,данные по продукции протеазы.

Штамм про- Количестдуцентво условных единиц

E.coli дд 5003 (исходный)О

Е. coli дд 5003 - ;:28

V..eltor Р-9898 (прототип)

312800084

Формула изобретениятута стандартизации и контроля меди цинских биологических препаратов

Штамм Escherichia coli ОД 5003 им. Л.А.Тарасевича), используемый Т-1 , № ,1.28 (Коллекция Государственно- для получения протеазы холерного го научно-исследовательского иисти- с вибриона.

Изобретение относится к микробиологии, может быть применено для получения протеазы холерного вибриона. Штамм Escherichia coli Qfl 5003 Т-1 получен путем котрансформации с ДНК векторной плазмиды pBR 322, переданной в клетки бесплазмидного штамма кишечной палочки QД 5003. Штамм несет плазм1зду pVib возбудителя холеры, определяющую синтез протеазы. Плазмида сообщает штамму способность расти на модифицированной диагностической соеде следующего состава, г/л: ,1; MgSO О, 1 ; ZnSQ. 0,05; NaCl 5,0; NaHCO O,25, агар Дифко 10, желатин 10, рН 7,2- 7,3. Желток смешивают в объеме 1: с физиологическим раствором, добавляют 70 мл этой эмульсии на 1 л готовой среды, охлажденной до 40-45. Штамм Escherichia doli РД 5003 Т-1 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под № 128. 1 табл. § (Л с о о